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上海哈灵生物科技有限公司
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细胞色素P450酶体系浓度定量检测试剂盒产品说明书
2020-1-15 阅读(519)
细胞色素P450酶体系浓度定量检测试剂盒产品说明书
主要用途
细胞色素P450酶体系浓度定量检测试剂是一种旨在通过一氧化碳处理产生的结合色素还原后，产生差异比色峰值的变化，来测定样品中酶系浓度的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞或组织裂解萃取液样品（动物、人体、植物等）、纯化微粒体样品以及体液样品（血清和血浆等）细胞色素P450酶系的总浓度检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
细胞色素P450酶是肝细胞微粒体复合功能单加氧化酶系统的总称，共有15000多种亚酶，其中动物和人体4778种、植物5769种、真菌3045种、细菌1200种等。作用在于体内外源化合物（xenobiotics），包括药物、致癌剂、化学污染物的氧化代谢，即单加氧化作用（monooxygenation）和羟化作用（hydroxylation）。细胞色素P450酶是微粒体中一氧化碳结合色素，在450nm波长产生峰值。
产品内容
缓冲液（Reagent A） 50毫升
还原液（Reagent B） 5管
稀释液（Reagent C） 5毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里，有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
一氧化碳：用于结合样品色素
比色皿：用于比色的容器
分光光度仪：用于比色分析
实验步骤
实验开始前，移出1毫升稀释液（Reagent C）到还原液（Reagent B）管里，混匀后，标记为反应工作液，置于冰槽里备用。
1．准备好待测样品（例如细胞或组织裂解萃取液或微粒体样品等），置于冰槽里
2．设定好分光光度仪（温度为25℃）：波长450nm和490nm，并置零
3．移取2毫克待测样品到1.5毫升离心管
4．加入适量的缓冲液（Reagent A）到总容量为900微升，混匀
5．插入一氧化碳管于液体中，气泡20秒（注意：使用微量一氧化碳，避免管内液体溢出）
6．加入100微升还原工作液，混匀
7．移入到1毫升比色皿
8．即刻放进分光光度仪检测，获得吸光读数
9．实际吸光读数：OD450－OD490
10．计算样品浓度：
[实际吸光读数X样品稀释倍数X 1.0（体系容量；毫升]÷[0.9（样品容量；毫升）X 91（毫摩尔吸光系数）]＝微摩尔/毫升÷（样品重量）毫克/毫升＝微摩尔/毫克
