大鼠前列腺素E2（PEG2）ELISA酶联免疫试剂盒　　

　　使用说明书

　　本试剂盒仅供研究使用。

　　检测范围：48T/96T

　　15pg/ml-360pg/ml

　　使用目的：

　　大鼠前列腺素E2（PEG2）酶联免疫分析试剂盒用于测定大鼠组织样本中大鼠前列腺素E2（PEG2）含量。

　　实验原理

　　大鼠前列腺素E2（PEG2）酶联免疫分析试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠前列腺素E2（PEG2）水平。用纯化的大鼠前列腺素E2（PEG2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入前列腺素E2（PEG2），再与HRP标记的前列腺素E2（PEG2）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的前列腺素E2（PEG2）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠前列腺素E2（PEG2）浓度。

　　试剂盒组成

　　120倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液3ml×1瓶

　　2酶标试剂3ml×1瓶8标准品（720pg/ml）0.5ml×1瓶

　　3酶标包被板12孔×4条9标准品稀释液1.5ml×1瓶

　　4样品稀释液3ml×1瓶10说明书1份

　　5显色剂A液3ml×1瓶11封板膜2张

　　6显色剂B液3ml×1/瓶12密封袋1个

　　标本要求

　　1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

　　2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

　　3．组织处理：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

　　操作步骤

　　1.标准品的稀释：大鼠前列腺素E2（PEG2）酶联免疫分析试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

　　360pg/ml5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

　　180pg/ml4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

　　90pg/ml3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

　　45pg/ml2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

　　22.5pg/ml1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

　　2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

　　4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

　　5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　7.温育：操作同3。

　　8.洗涤：操作同5。

　　9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

　　10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

　　11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

　　计算

　　以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

　　注意事项

　　1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

　　4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。

　　5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6．底物请避光保存。

　　7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

　　8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

　　9．本试剂不同批号组分不得混用。

　　10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

　　保存条件及有效期

　　1．试剂盒保存：2-8℃。

　　2．有效期：6个月。