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上海哈灵生物科技有限公司
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公司信息
细胞沉默调节蛋白1 （SIRT1）活性荧光定量检测说明书
2015-4-17 阅读(696)
| 提 供 商 | 上海哈灵生物科技有限公司 | 资料大小 | 49KB |
|---|---|---|---|
| 资料图片 | 下载次数 | 266次 | |
| 资料类型 | WORD 文档 | 浏览次数 | 696次 |
主要用途
细胞沉默调节蛋白1 （SIRT1）活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过荧光探针氨甲基香豆素标记人工合成的乙酰化p53多肽底物，经过SIRT1脱乙酰基后，被位点特异性氨基肽酶水解，释放黄色对硝基苯胺，即采用荧光法来测定细胞裂解萃取样品中酶活性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体）、核蛋白样品、部分或*纯化酶样品中SIRT1的活性定量检测，以及抑制剂和激活剂的筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
人体组蛋白脱乙酰基酶（histone deacetylase；HDAC）家属分成三类共20多个蛋白：种类I（class I）与酵母Rpd3蛋白同源，包括HDAC1、2、3、8，存在于细胞核中；种类II（class II）与酵母Hda1蛋白同源，包括HDAC4、5、6、7、9a、9b、10和HDRP/MITR，存在于细胞核和细胞浆里；上述两大种类的蛋白分子催化结构域含有锌，且曲古菌素A（trichostatin A；TSA）敏感。种类III（class III）为NAD+辅助因子必需，又称为sirtuins，与酵母Sir2（Silent Information Regulator 2）同源，包括SIRT1至7等，为曲古菌素A（trichostatin A；TSA）不敏感型赖氨酸脱乙酰基酶（lysyl-deacetylase）。催化赖氨酸脱乙酰基反应，以及由NAD+和乙酰（acetyl）基团转化产生的烟酰胺（nicotinamide）和O-乙酰ADP核糖（O-acetyl-ADP-ribose）。SIRT1位于细胞核内，与酵母Sir2同源性zui高。其功能在于调节p53活性和抑制细胞凋亡。基于人工合成的乙酰化p53（379至382氨基酸位点）多肽底物Ac-Arg—His-Lys-Lys（Ac）具有抗氨基肽酶切离的功能，首先使用荧光染料氨甲基香豆素（aminomethylcoumarin；AMC）来标记乙酰化p53多肽底物，其次进行脱乙酰化，zui后底物进一步在氨基肽酶的催化酶解，释放出具有强烈荧光的7-氨-4甲基香豆素（7-amino-4-methylcoumarin；AMC）（激发波长350-360nm；散发波长450-465nm），由此来定量测定沉默调节蛋白1的活性。其反应系统为：
