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上海哈灵生物科技有限公司
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公司信息
细胞/组织高质纯化溶酶体分离试剂盒
2017-5-31 阅读(811)
| 提 供 商 | 上海哈灵生物科技有限公司 | 资料大小 | 70.8KB |
|---|---|---|---|
| 资料图片 | 下载次数 | 89次 | |
| 资料类型 | WORD 文档 | 浏览次数 | 811次 |
主要用途
细胞/组织高质纯化溶酶体（lysosome）分离试剂是一种旨在从动物细胞或组织中分离出活性完整而高度纯化的溶酶体细胞器的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于动物软组织（肝或脑组织）和培养细胞的溶酶体的制备。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定，分离产量和纯度俱佳。
技术背景
溶酶体（lysosome）是一种普遍存在于真核细胞中的细胞器，含有酸性水解酶，例如酯酶、淀粉酶、蛋白酶、核酶等，分解各种细胞残渣和废弃物质，包括过多的或破损的其它细胞器、食物颗粒、吞噬的细菌和病毒等。其大小为0.5至1.5微米，球圆形，溶酶体内pH为5.0左右。溶酶体功能异常会引起溶酶体贮积症（1ysosomal storage disorders；LSDs），例如家族性
病（Tay-sachs disease）和庞贝氏症 （Pompe’s disease）。溶酶体细胞器的分离是现代细胞生物学研究的zui常用的手段之一。从任何组织或细胞分离溶酶体的技术方法基本上采用：*，通过机械或化学方法破裂细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得溶酶体；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的溶酶体。
用户自备
HANK平衡盐缓冲溶液（12028）或PBS缓冲溶液（12033）：用于清理细胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（12024）：用于细胞脱离
*细胞培养液（12052）：用于细胞处理所需的培养基
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
50毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
6毫升超速离心管：用于超高速离心的容器
4℃台式离心机：用于沉淀细胞
4℃超速离心机：用于分离细胞器成分
DOUNCE匀浆器：用于裂解组织细胞
注意事项
1．本产品为10次（1克动物组织或 108细胞）操作
2．所有操作均须严格在4℃或以下状态进行
3．操作时，须戴手套
4．操作时，须无菌操作，避免污染母液，尤其是裂解液（Reagent B）、分离液（Reagent E）和高纯液系列
5．建议使用足够的样品量
6．建议严格控制操作时间
7．通常匀化次数为40至80下（或细胞颗粒群/组织块状消失为止）达到80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升匀浆物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加匀化次数
8．通常孵育5分钟（不宜超过5分钟）达到80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升裂解物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加孵育时间和涡旋震荡次数
9．对于难以裂解的细胞，例如HeLa细胞，采用物理匀浆法是优先推荐的技术处理
10．使用高纯液前，须摇匀后加入
11．根据超速离心管的大小调整高纯液的使用量或在样品上面加上石蜡油填满
12．通常1克动物组织或 108细胞的溶酶体含量为300微克左右溶酶体蛋白
13．本产皮可以获得99％以上纯度的溶酶体
14．溶酶体标志酶活性测定，建议使用通用型N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）活性比色法定量检测试剂盒—70031.1和纯化溶酶体酸性磷酸酶活性比色法定量检测试剂盒—50318.3
15．溶酶体形态和功能染色，建议使用细胞溶酶体形态染色试剂盒—10121和纯化溶酶体功能中性红检测试剂盒—10323
16．本公司提供系列溶酶体分析试剂产品
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定分离的溶酶体内外膜完整
3．本产品经鉴定分离的溶酶体维持正常活性
4．本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶
