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近年来,干细胞不止是生命科学和医学研究的热点,也常是人们茶余饭后的谈资。从*否决干细胞研究法案到黄禹锡造假风波,干细胞研究总是占据报纸的大幅版面。为什么这么热门?因为干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞(北京雅安达生物技术有限公司),有望用来修复那些被疾病和创伤所破坏的各种各样的细胞和组织,从而为多种慢性疾病的治疗带来了希望,例如帕金森病、老年痴呆症、糖尿病、心血管疾病,甚至癌症。
干细胞根据细胞来源的不同,可分为胚胎干细胞和成体干细胞两大类。当受精卵分裂发育成囊胚时,内层细胞团(Inner Cell Mass)的细胞即为胚胎干细胞。胚胎干细胞具有性,可以自我更新并具有分化为体内所有组织的能力。进一步说,胚胎干细胞(ES细胞)是一种高度未分化细胞。它具有发育的性,能分化出成体动物的所有组织和器官,包括生殖细胞。成体干细胞是指存在于组织中的未分化细胞,该种细胞能够自我更新并能够分化形成组成该类组织的细胞,包括间充质细胞、造血干细胞、神经干细胞等。成年动物的许多组织和器官,比如表皮和造血系统,具有修复和再生的能力,成体干细胞在其中起着关键的作用。然而与胚胎干细胞不同的是(北京雅安达生物技术有限公司),这种干细胞在培养时生存时间有限制并且只能分化成有限的几种细胞类型。
目前干细胞有几百种之多,而且它们的培养特性也各异,就重复性而言,干细胞培养领域还面临着极大的困难。为干细胞提供一个*的培养条件,尤其是保证细胞处于未分化状态或者在需要的时候使细胞向专一的方向分化,是干细胞研究中zui大的挑战。
干细胞的培养
zui初的胚胎干细胞培养都少不了小鼠胚胎成纤维(MEF)细胞制备的滋养层。MEF向培养基中分泌一些未知因子,能支持干细胞生长。后来,研究人员发现在培养小鼠ES 细胞时,向培养基中添加白血病抑制因子(LIF)可以代替滋养层细胞而维持ES 细胞的自我更新能力,但LIF并不能维持人类胚胎干细胞(hESC)的未分化状态。因此大部分实验室还在使用细胞滋养层。然而,MEF细胞在体外的增殖能力较差,且随着传代次数增加,其支持hESC生长的能力降低,需要不断地制备原代MEF细胞,昂贵、费时。而且鼠源性的MEF可能引起动物源性病原体或支原体的污染,因此很多研究组尝试用各种人源细胞直接作为饲养层。但也不是所有人源细胞都能很好地支持hESC的生长,而且用异体来源的细胞仍存在一定的交叉污染危险https://www.hbzhan.com/st103691/Product_5642681.html。基于这些原因,研究人员希望能开发出无滋养层、无血清、成分确定的hESC培养体系。
BD生物科学公司、加拿大StemCell公司就和的WiCell研究所建立了战略合作关系,开发出更优化、无滋养层的人胚胎干细胞培养环境,包括成分确定的无血清培养液和合适的培养基质。
StemCell公司优化了WiCell 研究所的mTeSR 1培养液配方,并将其商品化。mTeSR 1培养液是一种*、成分确定的无血清培养液。在BD公司Matrigel 基质上,mTeSR 1可用于未分化状态hESC的维持和扩增,而不必添加其他生长因子。在mTeSR 1中未分化的hESC保持多能标记如Oct-3/4和SSEA-3的高表达。在畸胎瘤测定中,hES可分化成三种胚层的能力也证明了其多能性。
hESC理想的培养环境包括无血清及成分确定的培养液和一个适合hESC生长的培养表面。BD的Matrigel 基质大家应该都听说过吧,是一种从Engelbreth-Holm-Swarm(EHS)小鼠恶性肿瘤基膜分离的再生基膜,主要成分是层粘蛋白、IV型胶原和蛋白糖苷肝素硫酸盐,还包含了生长因子、基质金属蛋白酶等。BD公司在此基础上开发了一种更适合hESC生长的优化表面——Matrigel hESC-qualified Matrix,能与StemCell公司的mTeSR 1相匹配,为hESC研究提供了必需的重复性和一致性。mTeSR 1和BD Matrigel™ 基质的结合使用可培养各种WiCell hESC多至20代https://www.hbzhan.com/st103691/Product_5642681.html。
Invitrogen也推出了StemPro hESC SFM——一种*确定的无血清培养基,用于培养人胚胎干细胞。它已经证明能在一系列hESC中维持细胞的多能性。Geltrex matrix则是与StemPro hESC SFM配套使用的基质。它的主要成分与Matrigel类似,但简化了生长因子,使批次间稳定性提高,并模拟了体内的环境,为细胞培养提供了一种3D脚手架,使细胞真正感到宾至如归https://www.hbzhan.com/st103691/Product_5642681.html。另外,Invitrogen还推出了*用于人类胚胎的*确定的基质——CELLstart。它不含细胞来源成分,可以支持hESC贴壁和扩增,并维持多能性和分化能力。CELLstart也能用于间充质干细胞和神经干细胞。
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