北京雅安达生物技术有限公司

大鼠糖化白蛋白(GA)ELISA检测试剂盒说明书

时间:2014-2-28阅读:376
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 大鼠糖化白蛋白(GA)ELISA检测试剂盒

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检测原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被大鼠糖化白蛋白(GA)捕获抗原的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠糖化白蛋白(GA)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

 大鼠糖化白蛋白(GA)样品收集、处理及保存方法

1.  血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

 大鼠糖化白蛋白(GA)操作步骤

  1.   从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
  2.   设置标准品孔、样本孔和空白孔,空白孔什么都不加;标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
  3.   待测样本孔先加待测样本10μL,再加*40μL;
  4.   随后标准品孔和样本孔中(空白孔不加)加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体50μL,,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
  5.   弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
  6.   所有孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7.   所有孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD

 大鼠糖化白蛋白(GA)免责声明

1.   试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或大鼠体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。

2.   严格按照说明书操作,不同批号不可交换使用,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。

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