名称：*现货|Percoll

货号：17-0891-01
规格：1L原装
产地：Pharmacia

（一）　原理
Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。此外，Percoll不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒，还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。渗透压很低（<20mosm／kg H２O）, 粘度也很小，可形成高达1.3g／ml密度，采用预先形成的密度梯度时可在低离心力（200～1000g）于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由于Percoll扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。
（二）操作方法及注意事项
1.不同浓度（密度）Percoll溶液的制备: 先用9份Percoll与1份8.5％ NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液（0.85％ NaCl或0.15M PBS）稀释到所需浓度。
Percoll浓度（％）　　70　　　　60　　　　50　　　　40　　　　30　　　　　20
比重g／ml　　　 1.090 1.077 1.067 1.056 1.043 1.031
2.装样：样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。
3.有时大部分细胞位于Percoll层中,则需要逐层收集。收获含有Percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。取样：当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;
4.不连续密度梯度Percoll层的制备: 先将试管壁用牛血清湿润，使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置，除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下，有时相邻两层Percoll比重相差不大时，可将Percoll液放入注射器中，小针头斜面紧贴管壁，任其自然慢慢流下。
5.离心：一般采用离心力为400g，时间20～25min。由于多层Percoll之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。

　　（三）分离纯化细胞举例
1.富含NK活性大颗粒淋巴细胞（LGL）的纯化:按顺序由下向上逐层加50％、47.5％、45％、42.5％和40％五种不同密度的Percoll,如用10ml试管（或塑料管）分离,每层Percoll约1.2～1.5ml，初步从外周血中分离的PBMC细胞1×10８悬于１ml培基中，按要求装样、离心和取样。一般富含NK杀伤活性的LGL细胞位于42.5％与45％Percoll界面以及上下二层的Percoll液中。