人脑红蛋白 NGBELISA试剂盒
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北京雅安达生物技术有限公司立足于北京,面向全国。本产品应用于“科研研究和临床应验”
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主营产品: ELISA试剂盒,生物试剂,免疫组学,生物抗体,蛋白组学,分子生物等。
预期应用:ELISA法检测血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中含量或灵敏度。
1. 用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。
2. 每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
3. 为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。
4. 未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。标准品、*标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、*标记抗体工作液、或辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
5. 建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
洗板方法 手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将*的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡。 洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,*使用排枪加样。
请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。 如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请zui后乘以稀释倍数。 在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。底物请避光保存。 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
本品用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗HVA抗体的微孔中依次加入标本或标准品、*化的抗HVA抗体、HRP标记的亲和素,经过*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的HVA呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。1. 酶标仪(建议参考仪器使用说明提前预热)2. 微量加液器及吸头,EP管3. 蒸馏水或去离子水,全新滤纸
建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。 如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请zui后乘以稀释倍数。
生化试剂应用常见问题:
1 试剂空白
1 线性范围变窄 现象:高值测不高。原因:生产试剂时有效成分投料量不足;试剂成份稳定性较差。1.2 灵敏度变低现象:酶促反应速度曲线斜率下降,测定结果有严重系统误差。原因:试剂底物浓度不足。1.3 低值偏高 现象:试剂空白的变化曲线(吸光度VS时间)明显波动。原因:试剂自身不稳定,自行分解;工具酶纯度不够,杂酶含量超限,导致干扰作用。
2 样品信息
样品的溶血、脂血、黄疸等会对测定结果产生非化学反应的干扰。因此,应根据溶血、脂浊、黄疸的光谱吸收特性,采用双波长或多波长的检测模式,并在结果计算中扣除因溶血、脂血、黄疸引起的影响,减少干扰程度。
3 测定范围
每种待测物都有一个可测定的浓度或活性范围,样品结果若超过此范围,分析仪将显示结果超过范围的提示。表示试剂已经变质,应更换合格试剂。
4 底物耗尽
使用连续监测法、两点法测定酶活性时,若酶活性非常高,底物接近被耗尽,吸光度上升或下降会超过某一吸光度变化范围,监测期的吸光度将偏离线性,使测定结果不可靠。
5 酶的预活化
测定血清中的某些酶,如CK,离体(采血)后很容易失活。失活的原因是酶活性中心的活性基因巯基(一SH)被氧化造成的。只有通过适当的还原作用才能重新激活。如CK—NAC试剂盒即含有CK活化剂,名为N一乙酰半*。实验研究证明,NAC对血清中已失活的CK活化过程约需180 S。这就是CK测定为什么要延迟时间较长的理论依据。在AST,ALT采用IFCC*方法测定时需要磷酸吡哆醛预活化。需要强调:含有活化剂的生化试剂,其测定酶活性的结果要高些。了解更多详细信息
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