大鼠卵清蛋白特异性IgE （OVA sIgE）ELISA试剂盒

本试剂盒仅供研究使用

 特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的，且与其他相关蛋白无交叉反应。

有效期：6个月           

预期应用：ELISA法定量测定血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中的量。

北京雅安达生物技术有限公司提供外包服务：小鼠单抗Ig类/亚类鉴定、兽用抗病毒 药物的细胞水平检测（比如干扰素等）多肽半抗原的偶联、亲和层析柱制备（客户提供抗原抗体）咨询（  ）

说明                                                          

1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。

2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

3．中、英文说明书可能会有不*之处，请以英文说明书为准。

4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

实验原理

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、*化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素，经过*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制

1.         酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。

2.         标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。

3.         样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4.         *标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5.         辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6.         *标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7.         辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8.         底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9.         浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10.     终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

需要而未提供的试剂和器材

1.         标准规格酶标仪

2.         高速离心机

3.         电热恒温培养箱

4.         干净的试管和Eppendof管

5.         系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器

6.    蒸馏水，容量瓶等

标本的采集及保存

1.         血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.         血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.         细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

标本的稀释原则：

首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。zui后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。

标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为300 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。

如配制150 pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。