大鼠可溶性E选择素（sE-selectin）ELISA 试剂盒
产品英文名称：Rat soluble E-selectin,sE-selectin ELISA kit
规格：48T/96T
检测方法：双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）
标本：血清，血浆，细胞上清液，组织等
种属：Rat鼠
试剂盒说明书：请来电或者邮件索取
价格：询价（ : ：刘）

大鼠可溶性E选择素（sE-selectin）ELISA 试剂盒

ELISA关键步骤为以下几点:
1、尽量用八道或者十二道移液器加样。对于相同的试剂，经如二抗，酶，显色液，终止液等。
2、自己的样品，因为每一孔的样品不一样，用排枪加有些麻烦，如果一次的样品比较少，而自己加样又比较快，可以一个孔一个孔的加，但如果想一次把96或者48T的做完，可以先摆好一些PCR管或者准备一个96孔细胞培养板。将自己的样品先加到PCR管或者培养板中（此板间距与酶板板相同）。记得加一定的余量，如一次加样是50ul，可以先加70ul。加完后再用排枪加样，这样可以缩短加样时间，减小每个孔间的时间误差。
3、如果有多余的孔，标准品孔可以做复孔，在自己的样品前加一次标准品，加完样品后再加一次标准品。如果孔不够，那么可以将标准品放在样品中间加。

操作步骤 ：
1. 取出 试剂盒，室温（ 20 -25 ℃）放置 30 分钟。
2. 分组： 取出 96 孔板 根据待测样品数 量加上标准品的数量决定所需板条，把剩余的板条继续
冷藏处理，分别设标准品组（6个浓度）、空白 孔、待测样品组。
注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。
3. 加样：依照标准品的顺序分别加入100ul 的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入100ul的蒸馏水；其余微孔中加入100ul的待测样本。
4. 加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入50ul 的酶标溶液 （空白对照孔除外）。
5. 温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于 37 ℃恒温孵育恒温孵育 1小时。
6. 洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置15 -30s 30s，充分清洗酶标板5次，用吸水纸*拍干。
7. 显色：各孔加入显色剂A液 50ul 后，再加入显色剂 B液 50ul 。
8. 终止： 25 -37 ℃下避光反应10 -15分钟， 加入 50 ul 终止液。
9. 读板：在 450nm波长读取各孔的O 值。注： 读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹，读板时间控制在终止反应后的30 分钟内，以免影响准确性。

数据计算
1. 绘制标准曲线：各标准品 OD 值减去底色即坚强空白孔OD 值（数据处理如下），绘制标准曲线图。
1.1软件处理：建议用户使logit-log模式或四参数据处理模式（ y=（a-d）/（1+（x/c）^b）+d ）
1.2计算器或手工作图处理：Logit-log 计算：以6个标准品OD 值的 Logit为纵坐标 y，以标准品的浓度的 log值为横坐标X，绘制曲线图。logit值计算公式如下:logit=ln（B/ B0）（1－B/ B0）手工
作图：以标准浓度取log值为横坐标，对应的logit值为纵坐标，在普通坐标纸上或以标准浓度为横坐标，对应的 B/B0B为纵坐标在 logit-log坐标纸上画出标准曲线（理想化时是一条直）。
2. 根据待测样品的B/B0可以从坐标纸上查出样品的浓度值。注意：如果使用普通坐标纸，查出的数值应取反对数才是zui后浓度值。
3.敏感度：1.0µmol/L