柱式昆虫RNAout
产品及特点 本产品是专门用于从富含多糖、糖蛋白、粘蛋白的动物样品（尤其是昆虫样品）中提取总RNA的试剂。该产品特点如下：
1. 操作简单快速，处理一个样品只需要约十分钟。
2. RNA纯度高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能够有效去除大多数昆虫中的多糖污染。
3. 适用于各种昆虫组织，每100mg组织能提取到20-30ug 总RNA。
4. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
5. 一站式，提供RNase-free的样品收集管。
规格及成分 成 份 50次包装
溶液A 50 mL
溶液B 15 mL
溶液C 50 mL
离心吸附柱 50套
通用洗柱液 50 mL
RNA洗脱液 10 mL
使用手册 1份

运输及保存 常温运输，4℃保存（RNA洗脱液4℃保存），有效期一年。
自备试剂 氯仿。
使用方法 1. 将50-300mg昆虫组织放入10-15 mL塑料离心管中，加入1 mL溶液A，然后用匀浆器匀浆5-20秒。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。也可以使用液氮砚磨法破碎昆虫组织，砚磨完后加入1 mL溶液A。注意：溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀*溶解并充分摇匀后再取用。
2. 将匀浆物或砚磨物转移至干净的1.5 mL塑料离心管中（可以不必转移非液体的细胞碎片）。
3. 在离心管中加入0.3 mL的溶液B和0.2 mL自备氯仿，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4. 室温12,000 rmp离心3-5分钟，两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。
5. 将上清液（约0.6 mL）转移到另一干净的1.5 mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。留下100 uL上清液不取。
6. 加入等体积的溶液C，充分颠倒混匀。
7. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12,000 rmp室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中， 12,000 rmp室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 加0.7 mL通用洗柱液，室温12,000 rmp离心半分钟，弃穿透液。
10. 加0.3 mL通用洗柱液，室温12,000 rmp离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。
11. 室温12,000 rmp离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
12. 将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中，加入50-100 uL RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
13. 12,000 rmp室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子（BioTechniques，28：414，2000）。注意：大部分昆虫的28S RNA被切割成两个小的片段，彼此用氢键相连，所以在甲醛变性胶中，没有28S带出现（文献见：Eva C. Winnebeck，Craig D. Millar and Guy R. Warman，Why does insect RNA look degraded? Journal of Insect Science: Vol. 10：1-7）
15. RNA产量产率测定：将5-10 μL RNA溶于TE缓冲液中（pH7.5-8.2之间）检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度X体积）和产率（RNA产量/组织用量）。
16. RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间（具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关），高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。