谷研试剂-裂解细胞

          elisa试剂盒可以采用多种不同的方法裂解组织，依据所研究的细胞或组织的类型不同以及抗原的zui终用途选择适当的方法。对无细胞壁的细胞用温和的去污剂即可溶解。反之，则需采用某些机械的剪切或酶消化法来去除细胞壁。如果经过zui后处理的抗原不需保持完好的三维结构或生化活性，细胞可在比较剧烈的变性条件下裂解，然后将变性剂稀释，再加入特异性抗体。

             elisa试剂盒许多提取条件均可以使各种蛋白酶释放，若释放到裂解液内的蛋白酶其消化作用影响免疫沉淀，则可采取两种方法减弱其作用。首先，必须保持标本冷却，因温度可影响大多数蛋白酶的降解速度。其次，可在溶解缓冲液内加入蛋白酶抑制剂。以下为常用的蛋白酶抑制剂，其中aporotinin和苯甲基磺酰氟化物(PMSF)zui常用。但是几种蛋白酶抑制剂混合使用，特别是作为进一步试验的起点时，这样有助于确定该抗原的*抑制剂。

    其他来源细胞的裂解    几乎所有来源的材料均可作为免疫沉淀的起点，包括不同来源的整个器官、冰冻的组织块、血样、层析柱分部洗脱液或环境样本。若样本要求裂解细胞以释放抗原，则是进行一系列对照实验以确定的提取方法。总之，其原则是在释放尽可能多抗原，引起尽可能少的蛋白变性的前提下将可溶性抗原从颗粒基质中分离出来，而且要避免或消除大分子DNA进入溶液。裂解液的量要减少至压积细胞量的10倍，在允许的情况下可增加至50—100倍。zui后应注意的是所有的操作在冰上进行，保持尽可能低的温度以减少所释放的蛋白酶降解抗原的能力。另外，除非有特殊要求，推荐使用蛋白酶的抑制剂。