小鼠胰淀素(Amylin)ELISA试剂盒其他指标:786-O [786-0](肾透明腺癌) 粒趋化蛋白-2(GCP-2/CXCL6) 艾杜糖硫酸
A172(胶质母瘤) 黏膜地址素黏附分子(MAdCAM-1) N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)
SW480 [SW-480](结肠癌) β干扰素(IFN-β/IFNB) L苯*解氨酶(PAL)
SHG-44(胶质瘤) 可溶性CD38(sCD38) 5核苷酸酶(5-NT)
Caco-2(结肠腺癌) 可溶性CD21(CR2/sCD21) 1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)
Caco-2(结肠腺癌) 可溶性瘦素受体(sLR) 肌酸激酶(CK)
U251(胶质瘤) Toll样受体9(TLR-9/CD289) 靶向核糖核酸酶(TR)
LS 174T(结肠腺癌) 转化生长因子β2(TGFβ2) 蛋白激酶C(PKC)
SK-N-MC(神经上皮瘤) 单核趋化蛋白4(MCP-4/CCL13) 醛缩酶(ALD)
小鼠胰淀素(Amylin)ELISA试剂盒操作步骤
方法一 双抗体夹心法
1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
方法二 间接法
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜;
2.次日洗涤3次;
3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;
4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml;
5.37℃孵育30-60分钟,洗涤;
6.’zui后一遍用DDW洗涤。
其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
试剂器材
试剂
(1) 包被缓冲液(PH9.60.05M碳酸盐缓冲液):
Na2CO3 1.59克
NaHCO3 2.93克
加蒸馏水至1000ml
(2) 洗涤缓冲液(PH7.4PBS):0.15M
KH2PO4 0.2克
Na2HPO4·12H2O 2.9克
NaCl 8.0克
KCl 0.2克
Tween-20 0.05% 0.5ml
加蒸馏水至1000ml
(3) 稀释液:
牛血清白蛋白(BSA) 0.1克
加洗涤缓冲液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5~10%使用。
(4) 终止液(2M H2SO4):
蒸馏水178.3ml,逐滴加入浓硫酸(98%)21.7ml。
(5) 底物缓冲液(PH5.0磷酸枣柠檬酸):
0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml
0.1M柠檬酸(19.2克/L) 24.3ml
加蒸馏水50ml。
(6) TMB(四甲基联苯胺)使用液:
TMB(10mg/5ml无水乙醇)0.5ml
底物缓冲液(PH5.5) 10ml
0.75%H2O2 32μl
(7) ABTS使用液:
ABTS 0.5mg
Elisa试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗体ELISA检测。