小鼠组织蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA试剂盒其他指标:C127(乳腺肿瘤) 血管内皮生长因子D(VEGF-D) 磷酸肌醇3激酶(PI3K)
MFC(胃癌) 血管内皮生长因子C(VEGF-C) 蛋白激酶B(PKB)
B16(黑色素瘤) 血管内皮生长因子D(VEGF-D) 血红素氧合酶2(HO-2)
B16(黑色素瘤) 血管内皮生长因子C(VEGF-C) 丙酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)
P815(肥大瘤) 血管内皮生长因子B(VEGF-B) 甲状腺过氧化物酶(TPO)
S-180(腹水瘤) 血管内皮生长因子(VEGF) αL岩藻糖苷酶(AFU)
RM-1(前列腺癌) 血管内皮粘附分子1(VCAM-1/CD106) 内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)
SAC-IIC3(腹水瘤) 可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL) 血红素氧合酶1(HO-1)
NG108-15 [ 108CC15 ](小鼠神经瘤与大鼠神经胶质瘤之融合) 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4) 诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)
SAC-IIB2(腹水瘤) 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3) 磷脂酶A2(PL-A2)
小鼠组织蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA试剂盒 操作步骤
方法一 双抗体夹心法
1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
方法二 间接法
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜;
2.次日洗涤3次;
3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;
4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml;
5.37℃孵育30-60分钟,洗涤;
6.’zui后一遍用DDW洗涤。
其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
试剂器材
试剂
(1) 包被缓冲液(PH9.60.05M碳酸盐缓冲液):
Na2CO3 1.59克
NaHCO3 2.93克
加蒸馏水至1000ml
(2) 洗涤缓冲液(PH7.4PBS):0.15M
KH2PO4 0.2克
Na2HPO4·12H2O 2.9克
NaCl 8.0克
KCl 0.2克
Tween-20 0.05% 0.5ml
加蒸馏水至1000ml
(3) 稀释液:
牛血清白蛋白(BSA) 0.1克
加洗涤缓冲液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5~10%使用。
(4) 终止液(2M H2SO4):
蒸馏水178.3ml,逐滴加入浓硫酸(98%)21.7ml。
(5) 底物缓冲液(PH5.0磷酸枣柠檬酸):
0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml
0.1M柠檬酸(19.2克/L) 24.3ml
加蒸馏水50ml。
(6) TMB(四甲基联苯胺)使用液:
TMB(10mg/5ml无水乙醇)0.5ml
底物缓冲液(PH5.5) 10ml
0.75%H2O2 32μl
(7) ABTS使用液:
ABTS 0.5mg
Elisa试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗体ELISA检测。