CBRH-7919肝癌细胞上海谷研科技有限公司的原代细胞株及血清,ATCC细胞株、hyclone澳洲特级胎牛血清,优等胎牛血清,标准胎牛血清,gibco特优级胎牛血清血清,新生牛血清。
细胞术检测样品制备方法
直接标记抗体(FITC标记抗体)CBRH-7919肝癌细胞:
(1) 收集1×106个细胞,800rpm离心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟,800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞,800rpm离心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞,冰上孵育10min,800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20ul抗体)的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待测即可。
(4) 用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。[2]
未标记抗体间接免疫荧光标记法:
(1)收集2×106个细胞,用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次,800rpm离心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min;2ml PBS重悬细胞,800rpm离心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞,冰上放置10min,800rpm离心5min。
(4)加入饱和剂量未标记抗体,冰上放置40min,800rpm离心5min,用2ml冷的PBS 重悬细胞,800rpm离心5min,洗去未结合一抗,重复一次。
(5)加入荧光标记(FITC)标记的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm离心5min,去上清,PBS洗涤两次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重悬细胞;固定待测。
(7)流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品(PI染色)的制备:
(1)待测样本制成单细胞悬液,然后200g离心5分钟,弃上清。
(2)用4℃预冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小时。
(3)调整细胞浓度为106细胞/毫升,取1毫升细胞悬液,用PBS洗三次,细胞重悬于1毫升PI染液中,37℃孵育30分钟即可进行流式分析。
(4)PI染液终浓度为50微克/毫升,RNase A终浓度为20微克/毫升。
其他*产品:
(R)-1-phenylethanethiol (R)-1-甲基苄硫酚 33877-16-6
TERT-BUTYL 2-AMINO-2-METHYLPROPYLCARBAMATE 95034-05-2
(2-AMinoethyl)-6-benzyloxyindole 31677-74-4
(2R,3S,5S)-3-(Benzyloxy)-5-[2-[[(4-Methoxyphenyl)diphenylMethyl]aMino]-6-(benzyloxy)-9H-purin-9-yl]-2-(benzyloxyMethyl)cyclopentanone (interMediate step 5) (2R,3S,5S)-3-苄氧基-5-[2-[[(4-甲氧基苯基)二苯基甲基]氨基]-6-苄氧基-9H-嘌呤-9-基]-2-苄氧基甲基环戊酮 142217-79-6
(2R,3S,5S)-3-(Benzyloxy)-5-[2-[[(4-Methoxyphenyl)diphenylMethyl]aMino]-6-(phenylMethoxy)-9H-purin-9-yl]-2-(benzyloxyMethyl)cyclopentanol (interMediate step 4) (2R,3S,5S)-3-苄氧基-5-[2-[[(4-甲氧基苯基)二苯基甲基]氨基]-6-苄氧基-9H-嘌呤-9-基]-2-苄氧基甲基环戊醇 142217-78-5
(2R,4S)-3-TERT-BUTYL 4-METHYL 2-TERT-BUTYLOXAZOLIDINE-3,4-DICARBOXYLATE 145625-08-7
(2R,4S)-4-Hydroxypyrrolidine-1,2-dicarboxylic acid 1-tert-butyl ester 2-Methyl ester (N-Boc-trans-4-Hydroxy-D-proline Methyl ester N-BOC-反式-4-羟基-D-*甲酯 135042-17-0
(2R,4S)-N-[1-[3,5-Bis(trifluoroMethyl)benzoyl]-2-(4-chlorobenzyl)piperidin-4-yl]quinoline-4-carboxaMide (2R,4S)-N-[1-[3,5-双(三氟甲基)苯甲酰]-2-(4-氯苄基)哌啶-4-基]喹啉-4-甲酰胺 177707-12-9
(2R,4S)-N-Boc-4-hydroxypiperidine-2-carboxylic acid Methyl ester (2R,4S)-N-BOC-4-羟基哌啶-2-甲酸甲酯 321744-26-7
(2R,5R)-(+)-2-TERT-BUTYL-3-METHYL-5-BENZYL-4-IMIDAZOLIDINONE (2R,5R)-(+)- 2-叔丁基-3-甲基-5 苄基-4-咪唑啉酮 390766-89-9
HINESOL 茅苍术醇 23811-08-7
(2R,6R)-2,6-diMethylMorpholine 2R,6R-二甲基吗啉 171753-74-5
(2S)-2-(1-Methylethyl)oxirane (S)-异丙基环氧乙烷 55123-01-8
LisdexaMfetaMine DiMesylate 赖氨酸安非他命*马利兰 608137-33-3
(S)-N-FMOC-2-(4'-PENTENYL) ALANINE (2R)-2-N-芴甲氧羰基氨基-2-甲基-6-庚烯酸 288617-73-2
(2S)-2-[[(9H-Fluoren-9-ylMethoxy)carbonyl]aMino]-2-Methyl-9-decenoic acid (2S)-2-N-芴甲氧羰基氨基-2-甲基-9-癸烯酸 288617-75-4
RalfinaMide (S)-2-[[4-[(2-氟苄基)氧基]苄基]氨基]丙酰胺 133865-88-0
3-(DiMethylaMino)-L-alanine 3-(N,N-二甲基氨基)-L-* 10138-99-5
(2S)-2-aMino-6-[[(2S)-4-aMino-2-hydroxybutyl]aMino]hexanoic acid 34994-11-1
(2S)-2-aMino-6-[8-[[(4S)-4-aMino-4-carboxy-butyl]aMino]-2,7,9-triazabicyclo[4.3.0]nona-3,5,7,9-tetraen-2-yl]hexanoic acid 124505-87-9
(2S)-2-AMino-8-nonenoic acid (2S)-2-氨基-8-壬烯酸 924307-76-6
细胞冻存
1.将细胞消化下来,移入离心管离心,弃上清
2.准备冻存液比例:50%FBS+40%培养基+10%DMSO(现用现配)
3.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内.
放入-20度冰箱2-4小时后.再放入-80度冰箱过夜,第二天放入液氮罐保存
原则 慢冻速溶
4.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内。
冻存时间。放入4度冰箱10分钟。再放入-20度冰箱30分钟-1小时。不能超过1小时。zui后放入-80度冰箱过夜。第二天放入液氮中。
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