L6大鼠成肌细胞 上海谷研科技有限公司的原代细胞株及血清,ATCC细胞株、hyclone澳洲特级胎牛血清,优等胎牛血清,标准胎牛血清,gibco特优级胎牛血清血清,新生牛血清。
细胞术检测样品制备方法
直接标记抗体(FITC标记抗体)L6大鼠成肌细胞 :
(1) 收集1×106个细胞,800rpm离心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟,800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞,800rpm离心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞,冰上孵育10min,800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20ul抗体)的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待测即可。
(4) 用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。[2]
未标记抗体间接免疫荧光标记法:
(1)收集2×106个细胞,用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次,800rpm离心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min;2ml PBS重悬细胞,800rpm离心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞,冰上放置10min,800rpm离心5min。
(4)加入饱和剂量未标记抗体,冰上放置40min,800rpm离心5min,用2ml冷的PBS 重悬细胞,800rpm离心5min,洗去未结合一抗,重复一次。
(5)加入荧光标记(FITC)标记的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm离心5min,去上清,PBS洗涤两次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重悬细胞;固定待测。
(7)流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品(PI染色)的制备:
(1)待测样本制成单细胞悬液,然后200g离心5分钟,弃上清。
(2)用4℃预冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小时。
(3)调整细胞浓度为106细胞/毫升,取1毫升细胞悬液,用PBS洗三次,细胞重悬于1毫升PI染液中,37℃孵育30分钟即可进行流式分析。
(4)PI染液终浓度为50微克/毫升,RNase A终浓度为20微克/毫升。
其他*产品:
N,N-DiMethylsphingosine N,N-二甲基鞘胺醇? 119567-63-4
N,N-DiMethyltryptaMine N,N-* 61-50-7
N,N-Diphenyl-N,N-Bis(4-(N,N-Bis(Naphth-1-yl)-AMino)-Biphenyl-4-yl)-Benzidine N,N'-二苯基-N,N'-二(4'-(N,N-二(1-萘基)-胺基)-4-联苯基)-联苯胺 292827-46-4
Methyl-2-deoxy-3,5-bis-O-(3,5-dichlorophenyl)-2-(fluoroMethylene)-alpha-D-erythro-pentofuranoside 甲基-2-脱氧-3,5-二-O-(3,5-二)-2-(氟亚甲基)-alpha-D-赤式戊呋喃糖苷 159944-91-9
Methyl-5-O-(tert.butyldiphenylsilyl)-2-deoxy-beta-D-erythro-pentofuranoside 1-甲氧基-5-O-(叔丁基二苯基硅烷)-2-脱氧-beta-D-赤式戊呋喃糖苷 130144-86-4
Methylvinyl ketone 丁烯酮 78-94-4
Metildigoxin 甲地高辛 30685-43-9
Metipranolol 美替洛尔 22664-55-7
Metofluthrin 甲氧苄氟菊酯 240494-70-6
Metolazone 美托拉宗 17560-51-9
MetopiMazine 美托哌丙嗪 14008-44-7
MetrizaMide 10gx1 / 50gx1 甲泛葡胺 31112-62-6
Metronidazole * 443-48-1
Metsulfuron Methyl 甲磺隆 74223-64-6
MEZLOCILLIN SODIUM * 51481-65-3
MG-132 MG132,蛋白酶体抑制剂 133407-82-6
Mibc Frother/ Methyl Isobutyl Carbinol 4-甲基-2-戊醇 108-11-2
Miconazole nitrate * 22832-87-7
Microcystin-RR 微囊藻毒素RR 111755-37-4
细胞冻存
1.将细胞消化下来,移入离心管离心,弃上清
2.准备冻存液比例:50%FBS+40%培养基+10%DMSO(现用现配)
3.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内.
放入-20度冰箱2-4小时后.再放入-80度冰箱过夜,第二天放入液氮罐保存
原则 慢冻速溶
4.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内。
冻存时间。放入4度冰箱10分钟。再放入-20度冰箱30分钟-1小时。不能超过1小时。zui后放入-80度冰箱过夜。第二天放入液氮中。
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