鱼总三碘甲状腺原氨酸含量测定(TT3)Elisa试剂盒说明书

应用双抗体夹心法测定标本中鱼总三碘甲状腺原氨酸(TT3)水平。用纯化的鱼总
三碘甲状腺原氨酸(TT3)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入总
三碘甲状腺原氨酸(TT3)抗原，再与HRP 标记的总三碘甲状腺原氨酸(TT3)抗体结合，形成
抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下
转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的总三碘甲状腺原氨
酸(TT3)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品
中鱼总三碘甲状腺原氨酸(TT3)浓度。

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5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备
用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器
将标本匀浆充分。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待
检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上
进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤：
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10 孔，在*、第二孔中分别加标
准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔、第二
孔中各取100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，
混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 弃掉，再各取50μl 分别加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各
取50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混
匀后从第七、第八孔中分别取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准
品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，
浓度分别为18pmol/L，12pmol/L ，6pmol/L，3pmol/L，1.5pmol/L）。

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