大鼠丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)说明书下载

实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)水平。用纯化的
大鼠丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次
加入丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)，再与HRP 标记的丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)抗体结合，
形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催
化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的丙酮酸脱氢酶
激酶1(PDK1)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计
算样品中大鼠丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)浓度。

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2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样
品zui终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混
匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30（48T 的20 倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T 的20 倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。

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