CAS:9015-85-4,T4 DNA连接酶,T4 DNA Ligase

英文名称：T4 DNA Ligase
CAS号：9015-85-4

级别：BR
分子量：55.3kDa，单体
来源：含有T4噬菌体克隆基因30的大肠杆菌
浓度：1u/ul（200CEU/ul）
活性定义：是指在ATP-PPi交换反应中，37℃、30分钟内将1nmol [32PPi]转换为Norit可吸收形式所需的酶量（weiss单位，1个weiss单位相当于约200个粘性末端连接单位。1个粘性末端连接单位：20ul反应体系（50mM Tris-HCL（PH7.5）, 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM（300ug/ml）的5-DNA末端）中，在16℃、30分钟内连接50%连接HindIII酶切的Lambda DNA 产物所需的酶量）
酶活性分析混合物：66mM Tris-HCL（PH7.6）, 10mM DTT, 6.6mM MgCL2, 0.066mM ATP, 3.3uM[32PPi]
保存液组分：20mM Tris-HCL（PH7.5）, 50mM KC1, 1mM DTT，0.1mM EDTA和50%（v/v）
10×T4 DNA Ligase缓冲液（#B69）：400mM Tris-HCL, 100mM MgCL2, 100mM DTT, 5mM ATP（PH7.5,25℃）
50% PEG溶液：50%（w/v）聚乙二醇4000
抑制剂：当反应体系中NaC1或KC1的浓度超过200 mM时，可强烈抑制T4 DNA Ligase活性
失活：65℃加热10分钟或70℃加热5分钟
注意：聚乙二醇（PEG）可极大地增加平末端DNA的连接效率，PEG4000在反应体系中的推荐浓度为5%（w/v）；T4 DNA Ligase与DNA结合会改变条带的琼脂糖凝胶电泳迁移率，为避免此现象，电泳前需处理样本或分子量标准。样本处理如下：样本与Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液（#R1151）混合，75℃加热5分钟或65℃加热10分钟后冰浴保存；转化时，连接产物的体积不得超过感受态细胞体积中的10%；电转化之前，先用氯仿抽提方法除去连接混合物中的T4 DNA Ligase，然后经乙醇沉淀纯化抽提产物
质量控制：测试表明无内切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。功能检测：粘性末端或平末端DNA的连接能力
性状：液体。该酶催化双链DNA或RNA中毗邻的5'磷酸基团和3'-羟基末端之间形成磷酸二酯键，还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA复合体中的单链切口，连接DNA的粘性和平末端，但该酶对单链核酸无酶活性。该酶需要辅因子ATP
用途：生化研究。粘性末端或平末端双链DNA的连接；双链寡核苷酸接头与双链DNA连接；双链DNA、RNA或DNA-RNA复合体中缺口的修复；连接酶介导的RNA检测；位点特异性突变；扩增片段长度多态性
保存： -20°C

CAS:9015-85-4,T4 DNA连接酶,T4 DNA Ligase

GRP2125,M-H平板,BR9CM
GRP1117,羟基磷灰石,250g
鹰嘴豆芽素A,标准品,Abiochanin A,≥98%,
P0038,特级胎牛血清/Fetal bovine serum（Defined FBS） ,BR,100毫升,保存：-20℃
GRP1723,脑浸液（猪）,用于配制培养较难生长的微生物培养,BR
GRP1790,葡萄糖磷酸盐蛋白胨水（VP-MR试验用）,供VPMR试验用（GB标准）,250g
CAS:129572-48-1,5-溴-4氯-3-吲哚N-乙酰-β-D-氨基半乳糖苷/5-溴-4-氯-3-吲哚基-N-乙酰-β-D-氨基半乳糖苷/X-GalNAc,超纯,98%,25毫克,保存：-20℃
CAS:1087-21-4,间苯二甲酸二烯丙酯/间酞酸二烯丙酯/1,2-苯二甲酸二-2-丙烯酯/间苯二甲酸二丙烯酯/异苯二甲酸二烯丙酯/间苯二甲酸丙烯酯/Dially isophthalate,AR,98%,25毫升,RT
苯磺酸*,标准品,含量测定,100mg,常温,避光
CAS:10117-38-1,无水亚硫酸钾/亚硫酸钾/Potassium sulfite,CP,95%,500克,RT
L-*,标准品,含量测定,100mg,常温,避光
*,标准品,含量测定,100mg,常温,避光
GRP1690,亚硝酸盐（产气）,15支
CAS:519-62-0,叶绿素B/叶绿素镁/Chlorophyll B,BR,90%,1毫克,避光,-20℃