问题1：培养液pH 值变化太快

　　可能原因

　　（1）CO2 张力不对

　　（2）培养瓶盖拧得太紧

　　（3）NaHCO3 缓冲系统缓冲力不足

　　（4）培养液中盐浓度不正确

　　（5）细菌、酵母或真菌污染

　　建议解决方法

　　（1）按培养液中NaHCO3 浓度增加或减少培养箱内CO2 浓度，2.0g/L 到3.7g/L 浓度NaHCO3 对应CO2 浓度为5% 到10%。

　　（2）松开瓶盖1/4 圈。

　　（3）改用不依赖CO2 培养液。加HEPES 缓冲液至10 到25mM 终浓度。

　　（4）在CO2 培养环境中改用基于Earle′s 盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用Hanks 盐配制的培养液。

　　（5）丢弃培养物，或用抗生素除菌。

　　问题2：培养液出现沉淀，但pH值不变

　　可能原因

　　（1）洗涤剂清洗后残留有磷酸盐，将培养基成分沉淀下来

　　（2）冰冻保存培养液

　　建议解决方法

　　（1）用去离子水反复冲洗玻璃器皿，然后灭菌。

　　（2）将培养液加热到37℃，摇动使其溶解如沉淀仍然存在，丢弃培养液。

　　问题3：培养液出现沉淀， 同时pH 发生变化

　　可能原因

　　细菌或真菌污染

　　建议解决方法

　　丢弃培养物，或用抗生素除菌。

　　问题4：培养细胞不贴壁

　　可能原因

　　（1）*消化过度

　　（2）支原体污染

　　（3）培养瓶瓶底不干净

　　（4）培养液pH值过碱（NaHCO3分解）

　　（5）消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不当

　　（6）细胞老化（如传代前细胞已汇合导致失去贴附性）

　　（7）接种细胞起始浓度太低或太高

　　建议解决方法

　　（1）缩短*消化时间或降低*浓度。

　　（2）分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。

　　（3）注意刷洗，或换用一次性塑料培养瓶

　　（4）使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2（将培养液敞口放入培养箱也可）

　　（5）重新配置消化液或培养液

　　（6）启用新的保种细胞

　　（7）调节*接种细胞浓度

　　问题5：悬浮细胞成簇

　　可能原因

　　（1）培养液中含钙、镁离子

　　（2）支原体污染

　　（3）蛋白酶过度消化使得细胞裂解释

　　（4）DNA污染

　　建议解决方法

　　（1）用无钙镁*洗涤细胞，轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液。

　　（2）分离培养物，检测支原体。如发现支原体污染，丢弃培养物。

　　（3）用DNase I 处理细胞。

　　问题6：原代细胞培养物污染

　　可能原因

　　原代培养组织在进入培养前已污染

　　建议解决方法

　　培养前用含高浓度抗生素的*反复冲洗组织。

　　问题7：培养细胞生长减慢

　　可能原因

　　（1）由于更换不同培养液或血清

　　（2）培养液中一些细胞生长必需成分如*或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏。

　　（3）培养物中有少量细菌或真菌污染

　　（4）试剂保存不当

　　（5）接种细胞起始浓度太低

　　（6）细胞已老化

　　（7）支原体污染

　　建议解决方法

　　（1）比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验。让细胞逐渐适应新培养液。

　　（2）换入新鲜配制培养液，或补加*及生长因子。

　　（3）用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物。或用抗生素除菌。

　　（4）血清需保存在-5℃ 到-20℃。培养液需在2-8℃避光保存。含血清*培养液在2-8℃保存，并在2 周内用完。

　　（5）增加接种细胞起始浓度。

　　（6）换用新的保种细胞。

　　（7）分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。

　　问题8：培养细胞死亡

　　可能原因

　　（1）培养箱内无CO2

　　（2）培养箱内温度波动太大

　　（3）细胞冻存或复苏过程中损伤

　　（4）培养液渗透压不正确

　　（5）培养液种有毒代谢产物堆积

　　（6）更多原因参考问题4和问题7

　　建议解决方法

　　（1）检测培养箱内CO2

　　（2）检查培养箱内温度

　　（3）取新的保存细胞种

　　（4）检测培养液渗透压。注意：大多数哺乳动物细胞能耐受渗透压为260 – 350 mOsm。加入额外试剂如HEPES或药物都有可能影响培养液渗透压。

　　（5）换入新鲜培养液

　　（6）更多解决方法参考问题4和问题7