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细胞免疫荧光实验步骤

阅读:596发布时间:2014-5-5

 

1. 细胞一定要贴在玻片上(可以放入24孔板),为后面照像打基础。细胞密度适中,大约60-75%满片即可,否则容易脱片。
2. 取出细胞后用4%多聚甲醛固定15分钟,现用现配。(以下各步骤切毋使玻片干燥)
3. PBS冲洗
4. 0.1%Triton作用20分钟
5. PBS冲洗 

6. 10%正常血清封闭10分钟
7. 加入一抗,4度孵育过夜(找个小瓶盖将小玻片支起来,抗体就不容易溢出),还要记住砸片,就是抗体从较高处落到片子上,以分布均匀。抗体稀释度160,较常用!

8. PBS冲洗4次,各5分钟
9加入荧光二抗,室温30分钟。抗体稀释度1400,较常用!
10.  8
11. 90%甘油封片。也很关键阿,多封几次才有体会。
12. 避光保存,或到显微镜下观察。

 


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