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阅读:318发布时间:2014-12-29
磷酸化抗体提纯证明这个抗体只能与其相对应的磷酸化蛋白反应。
双抗体夹心法:
1)将该磷酸化抗体与固相载体连接,形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。
2)加受检标本:使之与固相抗体接触反应一段时间,让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合,形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。
3)加酶标抗体:使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。*洗涤未结合的酶标抗体。
4)加底物:夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。
应该设立两组,即一组固相抗体加磷酸化抗原,然后另一组固相抗体加非磷酸化抗原。然后显色后对比两组的OD差异。
加磷酸化抗体的组的OD当然高了。
酶标抗体是抗你的磷酸化蛋白的抗体啊,这个是要你自制的。底物你用zui普通的就行了,比如OPD、TMB等都行。
建议:酶标抗体用磷酸化抗体,而固化抗体不用磷酸化抗体,尤其是你的磷酸化蛋白只有1个磷酸化位点的时候。因为固相抗体和酶标抗体有可能去竞争结合磷酸化位点。
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