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半贴壁细胞的传代技术

阅读：6151发布时间：2017-9-25

贴壁细胞（adherent cells）这类细胞的生长必须有可以贴附的支持物表面，细胞依靠自身分泌的或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长，繁殖。当细胞在该表面生长后，一般形成两种形态，即成纤维样细胞性或上皮样细胞。

贴壁细胞传代时通常采用以下方法：

1.选用细胞生长状态好（90－95％），生长数量大于5×105 的细胞进行传代。

2.用移液枪充分吹打培养皿壁，使半贴壁细胞脱落下来（如果细胞贴壁比较牢，可使用*进行消化1-3min,用1~2滴血清终止消化）。

（注：消化液配比为：0.25％*＋0.02％EDTA。若贴壁细胞逐渐趋于圆形、部分悬浮后，即可用手指轻轻拍打细胞,培养瓶侧部或底部使大部分贴壁细胞脱落，之后立即加入细胞终止液，终止细胞消化。每种细胞的消化时间有差异，消化时注意观察，不要消化太久。）

3.将混匀后悬液吸至15ml离心管中，1000rpm*3min离心，去原培养基。

4.弃离心管中上清液，加入细胞培养液重悬细胞。细胞计数调整至5×105/ml。

5.细胞分瓶后，加入适量细胞培养液至细胞培养瓶中，置于5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养24小时。

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