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阅读:421发布时间:2016-11-11
CRISPR是规律成簇的间隔短回文重复(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)的缩写。CRISPR与内切酶Cas9是一对好朋友,细菌依靠它们组成的防御系统对抗外来侵略者。CRISPR-Cas9能够在引导RNA的指引下,靶标并切割入侵者的遗传物质。2012年研究者们利用这一特点,将CRISPR系统发展成了强大的基因组编辑工具。该系统使用简单而且扩展性强,很快便成为了生物学领域zui耀眼的明星。
在过去的四年中,CRISPR-Cas9经历了不断的更新换代。这一技术让基因功能研究达到了的性和灵敏度。CRISPR-Cas9在医疗领域也展现了*的潜力,有望通过直接校正致病突变治疗遗传疾病。不过,我们都知道Cas9会在脱靶位点结合和切割DNA。CRISPR脱靶效应常被人们挂在嘴边,这也是该技术zui大的隐患之一。Cas9酶有时会在靶点以外的地方进行切割,而这种切割有可能引起癌症。好在,研究者们在提升CRISPR特异性的时候动作很快。
今年一月,研究人员发表文章,为人们展示了升级版的多重化Digenome-seq。他们用这一技术同时分析了11个CRISPR-Cas9核酸酶在整个基因组中的特异性,大大节省了CRISPR脱靶分析所需的时间和经费。研究证实,多重化Digenome-seq可以捕捉到很多被其他方法漏掉的良性脱靶位点。研究人员还在此基础上给出了减少CRISPR-Cas9脱靶效应的指南。研究人员对CRISPR-Cas9技术做出了重大改进。在用一段短DNA片段替代另一段DNA时,他们的方法获得了高达60%的成功率,这么高的成功率是的。他们通过改造Cas9酶大大减少了它与DNA的非特异性互作,将脱靶效率降低至无法检测到的水平。
CRISPR-Cpf1能够在crRNA的引导下在人类细胞中剪切目标DNA,被称为是新一代的CRISPR基因组编辑系统。不过,人们对这个系统的作用机制还知之甚少。麻省总医院、哈佛医学院的研究人员解析了Cpf1核酸酶在人类细胞中的全基因组特异性。
研究人员开发了一种预测模型。这种模型可以为人们揭示哪些单导向RNA (sgRNA)序列能够与CRISPR-Cas9形成组合,更有效地探查基因组秘密。
研究团队揭示了CRISPR-Cas9剪切DNA时的关键分子结构。在CRISPR-Cas系统中,Cas蛋白与小CRISPR RNA(crRNA)形成复合体,切割与RNA互补的外源DNA。R-loop是I型和 II型CRISPR-Cas的一个典型特征,基因组编辑常用的sgRNA就会和Cas9形成R-loop。为了阐明R-loop的作用,研究人员通过冷冻电镜获得了酿脓链球菌Cas9 R-loop的高分辨率结构。
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