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Elisa试剂盒双抗体夹心法操作步骤

阅读:429发布时间:2015-1-19

1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为110μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml4 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。
2.加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37 孵育1小时。然后洗涤。

3.加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml37 孵育0.51小时,洗涤。
4.加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml37 1030分钟。
5.终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6.结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+"、“-"号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。


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