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Elisa试剂盒双抗夹心法具体实验步骤

阅读:2092发布时间:2015-4-23

ELISA双抗体夹心法的原理是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体,然后和待检血清中的相应抗原结合形成免疫复合物,洗涤后再加酶标记抗体,与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物,加底物显色,判断抗原含量。下面我们就来看一下elisa试剂盒双抗夹心法的具体实验步骤:

首先*步是包被,用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4 过夜。第二天,丢弃孔中的溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次洗涤3分钟。

第二步是加样,加一定稀释的待检样品0.1ml到已包被的反应孔中,置于37 的温度下孵育1小时。孵育完之后洗涤。

洗涤完之后需要做的是加酶标抗体在各个反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体0.1ml。37 孵育0.5~1小时,洗涤。

做完上个步骤,下面我们需要做的就是加底物液显色,在各个反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37 10~30分钟。

实验即将完成即终止反应,于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

实验的zui后一步即实验结果的判定,可在白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+"、“-"号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。



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