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免疫组化实验课堂：一抗跟二抗介绍

阅读：2102发布时间：2016-1-4

    不同的实验使用的抗体也大为不同，根据试验应用的类型、样本蛋白的结构性质、样本的种属、抗体宿主的种类以及抗体的标记和检测具体情况选择zui符合实验实际操作情况的单抗和二抗。一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，如：可以应用于WB  IHC  ICC  ELASA分析等，如果抗体说明书没有提及的应用类型。

    对于免疫组化而言，尽可能选择与样本不同种系物种的一抗，从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应，例如：检测小鼠样本蛋白，则不应选择小鼠或大鼠源的一抗，选兔源的一抗，则二抗则可选择偶联了检测分子（酶、荧光素、*等）的抗兔IgG。如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况，除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法，则抗体宿主物种的影响不大，如对不含IgG的细胞裂解物样本的western blotting检测，尽管如此，含有血清的组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白，还原变性样本中含IgG，在western blot检测中则结合出现IgG分子50 and 25 kDa的重链和轻链条带。

二抗的选择
    二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗anti-mouse secondary。建议检查二抗说明书确保该抗体适用于你的检测应用， 二抗一般连接荧光素FITC或发光团。

 


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