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冻存细胞复苏的步骤和注意事项

阅读:6128发布时间:2017-7-3

在实际操作中,冻存细胞要进行复苏,再培养传代。复苏细胞一般采用快速融化法。以保证细胞外结晶快速融化,以避免慢速融化水分渗入细胞内,再次形成胞内结晶损伤细胞。 

一、冻存细胞复苏的操作步骤

(1)佩戴眼镜和手套,从液氮罐中取出安瓿或冷冻管。

(2)迅速放入 38℃水浴中,并不时摇动,在 1 分钟内使其*融化,然后在无菌下取出细胞。

(3)在 1000r/min速度下离心 5~10 分钟,弃去上层液,加入适量培养液后接种于培养瓶中,接种浓度 1×109/L,置 37℃温箱静置培养,次日 更换一次培养液,继续培养,观察生长情况。若细胞密度较高,及时传代。或无需离心直接将细胞加入瓶中,并加入培养基贴壁培养 12~24 小时 后,充去上清,换入新鲜培养基继续培养。

 二、冻存细胞复苏的注意事项

1)从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存,但为对数生长期细胞。在冻存前一天换一次培养液;

2)将冻存管放入液氮容器或从中取出时,要做好防护工作,以免冻伤;

3)冻存和复苏用新配制的培养液。


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