看似简单的ELISA实验在操作过程中稍有不合理的地方，会造成很多问题，影响检测精度，降低测试质量。如花板，假阳性，全彩色，全彩色，颜色空间的低等问题，这就要求我们在实验过程多做总结，逐步完善，筛选ELISA实验各项步骤中的重点之重。
*：包衣液的选择
碳酸盐缓冲液通常选择9。6。但有时因为测试需求，数据包缓冲溶液是一种特殊的原料可采用中性包装。应注意以下原则：蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合，取决于在固相的疏水性基团和疏水性相互作用的载体表面蛋白分子的结构，物理吸附是非特异性的，蛋白分子量，等电点，大集中，小分子蛋白蛋白质通常含有疏水基团越多，所以更容易吸附在固相载体表面。测试也有很强的理论于实践，看zui后一个可以应用到我们的测试。除了刚才提到的9。6碳酸盐缓冲液常用的涂料溶液，和磷酸盐缓冲液和7-8 7。2 -缓冲。
第二：关闭
以下包之后是无关的蛋白质溶液浓度高，涂层工艺。随函附上使大量不相关的蛋白质充填这些空隙，和干扰物质的免疫排斥和吸附步骤。ELISA试剂盒常用的密封：0。05% - 0。5%牛血清白蛋白；10%或1%明胶牛血清；脱脂奶粉，价格相对低廉，可用于高浓度(5%～10%)；和一些罕见的使用各种动物血清(主要是为了消除类似的蛋白和酪蛋白等干扰)。但到底选择什么，根据实验的具体实践。
第三：洗板
可以说，在中操作，清洗是在主要的关键技术。由于聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍存在的，为了实现自由酶与客观相结合的标记的分离，在板料孔中残留游离和吸附的非特异性干扰物质的去除，洗涤，并应将干扰物质洗涤下来的非特异性吸附。所以在洗衣板会有一定的误差，非常人的因素(当然也有洗衣机除条件)，是不完整的或弦清孔，系统的影响是如此敏感，但不小。
第四：加抗体(抗标本和两个)
注意的枪头，样品用稀释稀释，也可以用稀释的闭解。如果要添加两个电阻，但也要注意两个反工作浓度的废物，太高，太低的光的颜色。
