本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T
2pg/ml-85pg/ml
使用目的：
本试剂盒用于测定兔血清、血浆及相关液体样本中可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)水平。用纯化的兔可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)，再与HRP标记的可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中兔可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)浓度。
试剂盒组成
1 | 30倍浓缩洗涤液 | 20ml×1瓶 | 7 | 终止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶标试剂 | 6ml×1瓶 | 8 | 标准品（160pg/ml） | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 9 | 标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 样品稀释液 | 6ml×1瓶 | 10 | 说明书 | 1份 |
5 | 显色剂A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2张 |
6 | 显色剂B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1个 |
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
- 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
80pg/ml | 5号标准品 | 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 |
40pg/ml | 4号标准品 | 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 |
20pg/ml | 3号标准品 | 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 |
10pg/ml | 2号标准品 | 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 |
5pg/ml | 1号标准品 | 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 |
- 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
- 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
- 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
- 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
- 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
- 温育：操作同3。
- 洗涤：操作同5。
- 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
- 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
- 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
