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用CRISPR揭示非编码RNA的秘密

阅读:374发布时间:2015-7-21

非编码RNA是指不编码蛋白质的RNA。真核生物的非编码RNA广泛参与了关键性细胞功能的调控。随着测序技术的飞速发展,研究者们发现了越来越多的新型非编码RNA,比如lncRNA、环状RNApiRNA等等。非编码RNA的丰度、保守性、结构和功能多样性,不仅丰富了我们的细胞生物学知识,还挑战了我们一直以来对真核生物基因组的认识。

介绍了一个以CRISPR-Cas9为基础的基因组靶向技术,CRISPR-Display。细菌一直在与病毒或入侵核酸进行斗争,为此它们演化出了多种防御机制,CRISPR/Cas适应性免疫系统就是其中之一。规律成簇的间隔短回文重复CRISPR与内切酶Cas9的组合,可以在引导RNA的指引下,靶标并切割入侵者的遗传物质。

CRISP-Disp系统中,失去催化活性的dCas9作为可编程的DNA结合蛋白,其特异性由引导RNA决定,gRNA上融合有异源的效应结构域。研究人员摸索出的gRNA-ncRNA融合方法,能将非编码RNA带到特定DNA位点,同时不影响dCas9的功能和活性。

对合成生物学研究者来说,CRISP-Disp的灵活性、模块化和多重化特性是很有吸引力的。据介绍,CRISP-Disp系统可以容纳约4.8 kbRNA结构域,这相当于天然lncRNA的长度。除了lncRNA以外,研究人员还对各种天然和人工非编码RNA进行了测试。研究表明,gRNA可以偶联多个非编码RNA结构域,这些结构域可以同时且独立的起作用。用CRISP-Disp招募RNA-蛋白复合体到特定位点,可以设计出复杂的基因调控回路。

除了合成生物学应用,CRISP-Disp还是一个研究非编码RNA功能的强大工具,包括近来备受关注的lncRNA。尽管人们为了理解lncRNA的功能和作用机制已经做出了很多努力,但能够全面靶标和分析lncRNA的平台并不多,还有很多问题没有得到解答。

还有一些非编码RNA也涉及了基因表达的激活。举例来说,在很多情况下基因表达需要增强子区域转录的RNA。然而,我们至今还不清楚eRNA究竟是如何起作用的,比如它可能改变DNA的拓扑结构,让增强子和启动子靠近。如果eRNA的激活功能是其序列的内在特性,那么将它添加到CRISP-Disp系统中就可以活化位置的任何基因。但就目前的研究结果来看,eRNA并没有在这个体系中起到强力的基因激活作用。这些结果支持了之前人们提出的假说,该假说认为eRNA可能是基因座特异性增强子复合体中的一个元件。


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