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上海沪宇生物科技有限公司
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阅读:334发布时间:2015-9-18
细胞有丝分裂,在某种程度上依赖于将纺锤体延伸以拉开染色体对的小细胞器。在它们执行这一重要任务及其他任务之前,这些微小的圆柱结构——在动物中被称为中心粒,在酵母中被称为纺锤体极体(SPBs)——必须进行自我复制。
然而,由于当前显微镜的限制,关于这个纳米级过程的许多见解,仍然没有得以揭示。光学方法不能解决低于某些波长极限的物体,而非光学方法,如电子显微镜只能研究无生命的细胞。
现在研究小组设计出一种新的光学技术————结构照明显微镜和单颗粒平均法相结合,来解决活酵母细胞中SPB复制的单个组件。在这个过程中,他们已经发现了许多曾被认为很老套的惊人事实。不仅如此,他们还在细胞成像领域开辟了新的可能性。
研究人员说:“使用SIM来研究SPB结构,*改变了我们可以问答的问题类型,因为样本数量不再受限制, SIM很可能在活细胞中起作用。"
多年来,EM——使用一束电子来实现分子甚至原子级分辨率,已经成为研究SPBs理所当然的技术手段。然而,EM有它的重大限制,例如,它在活细胞中不起作用。
该研究小组选择SIM作为一种光学替代品。SIM使用水平线的激光产生场,向一个样本上投射一个干扰图案。根据研究人员介绍,对这些模式进行分析,可使研究人员能够有效地将分辨率翻倍。
就其所有优点来说,SIM还涉及筛选相当多的噪音。要处理这个问题,并且更好地定位研究中的物体——可以假定它们有不同的形状和位置,该研究团队转向SPA。在这项技术中,研究人员将大量的图像在三维空间中沿着参考点对齐,然后将它们分为一个个单一的特征图像。结果得到一副关于“细胞内发生了什么"的更清晰、更可靠的图片。
SPA-SIM技术构成了双色结构照明显微镜方法的一部分,这种方法使用内源性表达的荧光蛋白的衍生物。通过基因技术,研究人员使目标蛋白质与2个标准的荧光蛋白相融合,它们将在酵母自然表达该基因的时候,呈现出来。
根据研究人员介绍,这项研究将SPA与SIM结合使用,是*篇关于双色超分辨率SPA的论文。此外,其他的研究都集中在几个蛋白质对,而目前的研究则描述了相当大一部分的大的、多蛋白质复合物。"
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