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详细介绍
北京松信宏泽科技有限公司
：潘女士
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喹诺酮类ELISA试剂盒
1 概要
氟喹诺酮类抗生素(QNS)常用于防止大型畜产动物或养殖鱼饲养时，由于饲养密度过高所造成的感染症状：尤其对于肺脏、泌尿及消化系统的细菌感染，氟喹诺酮类抗生素可达到预防与治疗的效果。然而，氟喹诺酮类抗生素对人体常引发副作用包括:胃肠道及头晕、失眠、头痛等中枢神经系统反应。
近十年来，由于氟喹诺酮类抗生素用于大型畜产动物或养殖鱼饲养明显增加，及人民对于食品健康日益重视，上纷纷限制氟喹诺酮类抗生素用于大型畜产动物或养殖鱼饲养。因此，监测氟喹诺酮类抗生素残留成为把守大众健康刻不容缓的议题。
传统上，一般是以HPLC筛选喹诺酮类抗生素残留量，再以LC/MS/MS进行zui后确认；然而，此过程花费太多时间与经费。因此，我公司开发出检测时间少于90分钟的氟喹诺酮类多合一ELISA试剂盒，本试剂盒操作简便且省时、经济、检测范围广(水产类与农畜类样品皆可适用)，且检测灵敏度高。
本试剂盒可用于定量、定性检测生乳、鸡肉、鱼肉、猪肉和虾等样品中氟喹诺酮药物的残留。
2 原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA法检测样品中的氟喹诺酮。在微孔板上预包被抗氟喹诺酮单克隆抗原，喹诺酮抗体和HRP标记的喹诺酮二抗竞争结合微孔板中氟喹诺酮抗原以及标准品或者样品中的氟喹诺酮，洗涤后用H2O2-TMB底物系统显色，样品吸光度值与其所含喹诺酮量成负相关，与标准曲线比较即可得出氟喹诺酮含量。
3 试剂盒组份
每个试剂盒中的试剂可进行96个测量（包括标准测定），试剂盒组份：
包被有氟喹诺酮抗原的酶标板---------------96孔（8孔/条×12条）
氟喹诺酮标准品溶液---------------------------------6瓶（1.5 mL/瓶）
分别为0号：0 μg/L；1号：0.1 μg/L；2号：0.3 μg/L；3号：0.9 μg/L；4号：2.7 μg/L；5号：8.1 μg/L。
10×浓缩洗涤液-------------------------------------------1瓶（40 mL）
5×浓缩样品复溶液---------------------------------------1瓶（40 mL）
抗体工作液 ---------------------------------------------1瓶（7 mL）
酶标记物----------------------------------------------------1瓶（12 mL）
底物溶液A---------------------------------------------------1瓶（7 mL）
底物溶液B---------------------------------------------------1瓶（7 mL）
终止液--------------------------------------------------------1瓶( 7 mL）
封板膜-------------------------------------------------------------------1张
说明书-------------------------------------------------------------------1份4 另外所需试剂和仪器
4.1 试剂
l 正己烷（分析纯）
l 乙腈（分析纯）
l 乙酸yi酯（分析纯）
l 二氯jia烷（分析纯）
l 十二水合磷酸氢二钠（分析纯）
l 二水合磷酸二氢钠（分析纯）
4.2 仪器
l 恒温培养箱
l 振荡器
l 均质机
l 天平(精确到0.01 g)
l 可调式 20~200 μL 和 100~1000 μL 微量移液器
l 酶标仪（450 nm）
l 离心机
l 氮吹仪
4.3 溶液的配制
l 样品复溶液：将5×浓缩样品复溶液与去离子水（或蒸馏水）按照体积比1:4的比例，混合均匀
l 0.05 M PBS：称取12.9 g十二水合磷酸氢二钠和2.18 g二水合磷酸二氢钠用去离子水（或蒸馏水）混合均匀定容至1 L
l 蜂蜜方法一提取液：量取35 mL乙酸yi酯和70 mL 二氯jia烷充分混合均匀
l 蜂蜜方法二提取液：称取5 g氯化钠，3 g十二水合磷酸氢二钠，0.2 g氯化钾，0.2 g磷酸二氢钾用去离子水（或蒸馏水)充分溶解定容至500 mL
喹诺酮类ELISA试剂盒
5 样品处理
5.1 牛肉、猪肉、鸡肉、猪肝、鸡肝
l 称取1 g 均质样品于50 mL离心管中，加入0.5 mL1×样品复溶液，充分涡动20 S，再加入4.5 mL乙腈，用振荡器振荡涡旋5min直至组织*分散均匀
l 室温4000 rpm离心10分钟
l 取1 mL上清液于另一干净10 mL离心管中于50~60℃氮气吹干
l 加入1 mL正己烷充分振荡涡旋30 S，再加入1 mL1×样品复溶液，振荡30 S，室温4000 rpm离心5分钟
l *弃除上层有机相以及中间层杂志，取下层液体待分析
l 鸡肉、猪肉样品，直接取50 μL下层液体用于分析，稀释倍数为5倍
l 牛肉、猪肝、鸡肝样品，取100 μL下层液体和100 μL1×样品复溶液，充分混合均匀后，取50 μL用于分析，稀释倍数为10倍
5.2 鱼肉、虾肉（稀释倍数为10倍）
l 取1 g均质样品置于50 mL离心管中，加入2 mL 1×样品复溶液，充分振荡涡旋1 min使组织*分散，再加入8 mL乙腈充分振荡混匀5 min
l 室温4000 rpm离心10分钟
l 取1 mL上清液于另一干净10 mL离心管中于50~60℃氮气吹干
l 加入1 mL正己烷充分振荡涡旋30 S，再加入1 mL1×样品复溶液，振荡30 S，室温4000 rpm离心5分钟
l *弃除上层有机相以及中间层杂志，取下层液体50 μL用于分析
5.3 牛奶
纯牛奶（稀释倍数为10倍）
l 取50 μL纯牛奶样品于离心管中，加入450 μL1×样品复溶液，震荡混合约1分钟
l 取50 μL用于分析
生鲜奶（稀释倍数为1倍）
l 直接取新鲜生鲜奶50 μL用于分析（如果生鲜奶中脂肪含量过多，则室温下4000 rpm离心10分钟，去除上层脂肪）
5.4 蜂蜜
方法一：（稀释倍数为2倍）
l 取1 g均质样品置于50 mL离心管中，加入2 mL 0.05 MPBS（见配液）震荡混合至蜂蜜*溶解，再加入8 mL蜂蜜方法一提取液（见配液）充分震荡混合5 min
l 室温4000 rpm离心10分钟
l 弃去上层液体，取下层有机相4 mL于50~60℃氮气吹干
l 加入1 mL正己烷充分振荡涡旋30 S，再加入1 mL1×样品复溶液，振荡30 S，室温4000 rpm离心5分钟
l *弃除上层有机相以及中间层杂志，取下层液体50 μL用于分析
方法二（稀释倍数为4倍）
l 取1 g均质样品置于50 mL离心管中，加入2 mL蜂蜜方法二提取液（见配液），涡旋震荡至蜂蜜*溶解
l 加入4 mL乙腈充分振荡混匀
l 室温4000 rpm离心10分钟
l 加入1 mL正己烷充分振荡涡旋30 S，再加入1 mL1×样品复溶液，振荡30 S，室温4000 rpm离心5分钟
l *弃除上层有机相以及中间层杂志，取下层液体50 μL用于分析
6 注意事项
l 使用前请先将喹诺酮标准溶液6瓶、样品复溶/稀释液、酶标抗原、底物溶液及微孔条置于室温下，至少回温30分钟。
l 取出所需微量测试孔条，将剩余未测之孔条立即放回铝箔袋中，置于2～8 ℃保存。
l 10×浓缩样品复溶液与10×浓缩洗涤液请用蒸馏水稀释10倍后使用，即10×浓缩样品复溶液：蒸馏水= 1：9 稀释，1×样品复溶液和1×清洗液可于2～8℃保存一周。
7 操作步骤
l 试剂准备：
1×洗涤液的配制，将10×浓缩洗涤液和蒸馏水（或去离子水）按1: 9充分混匀。
l 编号：将喹诺酮类标准品和待测样品对应微孔按序编号，建议每个标准品和待测样品均做重复孔。
l 加样：每孔加标准品或样品溶液50 μL，然后每孔分别加入50 μL 氟喹诺酮抗体工作液。
l 温育：轻轻振荡混匀，用封板膜封板后置于室温（20～25℃）避光静置30分钟。
l 洗涤：小心揭开封板膜，将孔内液体甩干，每孔加入1×洗涤液250 μL洗涤微孔板，连续洗板4~5次，每次间隔10S左右，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头戳破）。
l 加酶标记物：每孔加入氟喹诺酮酶标记物100 μL
l 温育：轻轻振荡混匀，用封板膜封板后置于室温（20～25℃）避光静置30分钟。
l 洗涤：小心揭开封板膜，将孔内液体甩干，每孔加入1×洗涤液250 μL洗涤微孔板，连续洗板4~5次，每次间隔10S左右，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头戳破）。
l 显色：每孔加入底物溶液A50 μL，再加入底物溶液B50 μL室温（20～25℃）避光静置15分钟。
l 测定：每孔加入终止液50 μL，轻轻振荡混匀，测定450 nm处吸光度值。
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