当前位置:上海友腾生物科技有限公司>>技术文章>>反转录试剂盒说明
反转录试剂盒采用经优化的稳定的反转录预混体系5×RTMasterMix进行RNA的反转录反应,该预混体系包含点突变致RNaseH活性缺失的反转录酶M-MLVⅢ、dNTP、反应Buffer和RNaseInhibitor。该试剂盒采用的反转录酶为经进一步改良的M-MLVⅢ,可以极大限度地抑制RNA结构与反转录酶的非特异性结合,不仅保证了的cDNA合成效率和cDNA合成速度,同时也使得合成的cDNA本底低、纯度高、完整性好。使用时只需加入模板、引物和RNaseFreeH2O即可,大大简化了操作过程,提高了效率,减少了操作过程中的人为误差,具有快速简便、重复性高、特异性好、灵敏度高和稳定性好的特点。本试剂盒提供了进行RT-PCR所需要的全部试剂。使用本试剂盒扩增得到的目的产物3'端具有A尾,可以直接克隆于T载体中。
储存:
请放置于-20°C,可保存两年,请避免反复冻融
操作方法
1.按以下组分配制反转录反应液
TotalRNAorPoly(A)RNA0.2-2μg
5×RTMasterMix4μl
*Oligo(dT)20Primer1μl
RNaseFreeH2OUpto20μl
*注:反转录引物可根据需要改用随机引物或
特异性引物。
2.在PCR仪上按以下条件进行反转录反应:
30°C5min
42°C30~60min
85°C5min
4°C
3.配置反应体系如下进行PCR扩增:
2×TaqPCRMix25μl
反转录产物1-5μl
上游引物(10μM)2μl
下游引物(10μM)2μl
灭菌双蒸水Upto50μl
4.PCR扩增循环参数上海友腾生物倾力为客户提供上万种科研试剂,提供*、zui全、zui有效的科研试剂产品,质量被全国各大院校科研机构认可。咨询!同时代理IBL,DRG ,R&D,HCB等品牌*试剂盒。
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