1、1MTris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)
□组份浓度1MTris-HCl
□配制量1L
□配置方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
pH值浓HCl
7.4约70mL
7.6约60mL
8.0约42mL
4.将溶解定容至1L。
5.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2、1.5MTris-HCl(pH8.8)
□组份浓度1.5MTris-HCl
□配制量1L
□配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.用浓盐酸调pH值至8.8。
4.将溶液定容至1L。
5.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
3、10×TEBuffer(pH7.4,7.6,8.0)
□组份浓度100mMTris-HCl,10mMEDTA
□配制量1L
□配置方法1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。
1MTris-HClBuffer(pH7.4,7.6,8.0)100mL
500mMEDTA(pH8.0)20mL
2.向烧杯中加入约800mL的去离子水,均匀混合。
3.将溶液定至1L后,高温高压灭菌。
4.室温保存。
4、3M醋酸钠(pH5.2)
□组份浓度3M醋酸钠
□配制量100mL
□配置方法1.称取40.8gNaOAc•3H2O置于100~200mL烧杯中,加入约40mL的去离子水搅拌溶解。
2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。
3.加入去离子水将溶液定容至100mL。
4.高温高压灭菌后,室温保存。
5、PBSBuffer
□组份浓度137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4
□配制量1L
□配置方法1.称量下列试剂,置于1L烧杯中。
NaCl8g
KCl0.2g
Na2HPO41.42g
KH2PO40.27g
2.向烧杯中加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.滴加HCl将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1L。
4.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:上述PBSBuffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。
6、10M醋酸铵
□组份浓度10M醋酸铵
□配制量100mL
□配置方法1.称量77.1g醋酸铵置于100~200mL烧杯中,加入约30mL的去离子水搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100mL。
3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。
4.密封瓶口于室温保存。
注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。
7、Tris-HCl平衡*
□配置方法
1.使用原料:大多数市售液化*是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化*呈粉红色或黄色,应避免使用。同时也应避免使用结晶*,结晶*必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此,*的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的*进行分子生物学实验。
2.操作注意:*腐蚀性*,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行,与*接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。
3.*平衡:因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,因此使用*前必须对*进行平衡使其pH值达到7.8以上,*平衡操作方法如下:
①液化*应贮存于-20℃,此时的*呈现结晶状态。从冰柜中取出的*首先在室温下放置使其达到室温,然后在68℃水浴中使*充分溶解。
②加入羟基喹啉(8-Quinolinol)至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不*抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。
③加入等体积的1MTris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。
④重复操作步骤③。
⑤加入等体积的0.1MTris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。
⑥重复操作步骤⑤,稍微残留部分上层水相。
⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。
⑧将*置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。
13、20%(W/V)Glucose
□组份浓度20%(W/V)Glucose
□配制量100mL
□配置方法1.称取20gGlucose置于100~200mL烧杯中,加入约80mL的去离子水后,搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100mL。
3.高温高压灭菌后,4℃保存。
14、SolutionI(质粒提取用)
□组份浓度25mMTris-HCl(pH8.0),10mMEDTA,50mMGlucose
□配制量1L
□配置方法1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。
1MTris-HCl(pH8.0)25mL
0.5MEDTA(pH8.0)20mL
20%Glucose(1.11M)45mL
dH2O910mL
2.高温高压灭菌后,4℃保存。
3.使用前每50mL的SoliutionI中加入2mL的RNaseA(20mg/mL)。
15、SolutionII(质粒提取用)
□组份浓度250mMNaOH,1%(W/V)SDS
□配制量500mL
□配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。
10%SDS50mL
2NNaOH50mL
2.加灭菌水定容至500mL,充分混匀。
3.室温保存。此溶液保存时间不要超过一个月。
注意:SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌。
16、SolutionIII(质粒提取用)
□组份浓度3MKOAc,5MCH3COOH
□配制量500mL
□配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。
KOAc147g
CH3COOH57.5mL
2.加入300mL去离子水后搅拌溶解。
3.加去离子水将溶液定容至500mL。
4.高温高压灭菌后,4℃保存。
17、0.5MEDTA(pH8.0)
□组份浓度0.5MEDTA
□配制量1L
□配置方法1.称取186.1gNa2EDTA•2H2O,置于1L烧杯中。
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌。
3.用NaOH调节pH值值8.0(约20gNaOH)。
注意:pH值至8.0时,EDTA才能*溶解。
4.加去离子水将溶液定容至1L。
5.适量分成小份后,高温高压灭菌。
6.室温保存。
18、1MDTT
□组份浓度1MDTT
□配制量20mL
□配置方法1.称取3.09gDTT,加入到50mL塑料离心管内。
2.加20mL的0.01M的NaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。
3.适量分成小份后,-20℃保存。
19、10mMATP
□组份浓度10mMATP
□配制量20mL
□配置方法1.称取121mgNa2ATP•3H2O,加入到50mL塑料离心管内。
2.加20mL的25mMTris-HCl(pH8.0),搅拌溶解。
3.适量分成小份,-20℃保存。
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