上海友腾生物科技有限公司

实验室常用缓冲液汇

时间:2014-3-4阅读:577
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  1、1MTris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)
  
  □组份浓度1MTris-HCl
  
  □配制量1L
  
  □配置方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。
  
  2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
  
  3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
  
  pH值浓HCl
  
  7.4约70mL
  
  7.6约60mL
  
  8.0约42mL
  
  4.将溶解定容至1L。
  
  5.高温高压灭菌后,室温保存。
  
  注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
  
  2、1.5MTris-HCl(pH8.8)
  
  □组份浓度1.5MTris-HCl
  
  □配制量1L
  
  □配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。
  
  2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
  
  3.用浓盐酸调pH值至8.8。
  
  4.将溶液定容至1L。
  
  5.高温高压灭菌后,室温保存。
  
  注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
  
  3、10×TEBuffer(pH7.4,7.6,8.0)
  
  □组份浓度100mMTris-HCl,10mMEDTA
  
  □配制量1L
  
  □配置方法1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。
  
  1MTris-HClBuffer(pH7.4,7.6,8.0)100mL
  
  500mMEDTA(pH8.0)20mL
  
  2.向烧杯中加入约800mL的去离子水,均匀混合。
  
  3.将溶液定至1L后,高温高压灭菌。
  
  4.室温保存。
  
  4、3M醋酸钠(pH5.2)
  
  □组份浓度3M醋酸钠
  
  □配制量100mL
  
  □配置方法1.称取40.8gNaOAc•3H2O置于100~200mL烧杯中,加入约40mL的去离子水搅拌溶解。
  
  2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。
  
  3.加入去离子水将溶液定容至100mL。
  
  4.高温高压灭菌后,室温保存。
  
  5、PBSBuffer
  
  □组份浓度137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4
  
  □配制量1L
  
  □配置方法1.称量下列试剂,置于1L烧杯中。
  
  NaCl8g
  
  KCl0.2g
  
  Na2HPO41.42g
  
  KH2PO40.27g
  
  2.向烧杯中加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
  
  3.滴加HCl将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1L。
  
  4.高温高压灭菌后,室温保存。
  
  注意:上述PBSBuffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。
  
  6、10M醋酸铵
  
  □组份浓度10M醋酸铵
  
  □配制量100mL
  
  □配置方法1.称量77.1g醋酸铵置于100~200mL烧杯中,加入约30mL的去离子水搅拌溶解。
  
  2.加去离子水将溶液定容至100mL。
  
  3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。
  
  4.密封瓶口于室温保存。
  
  注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。
  
  7、Tris-HCl平衡*
  
  □配置方法
  
  1.使用原料:大多数市售液化*是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化*呈粉红色或黄色,应避免使用。同时也应避免使用结晶*,结晶*必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此,*的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的*进行分子生物学实验。
  
  2.操作注意:*腐蚀性*,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行,与*接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。
  
  3.*平衡:因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,因此使用*前必须对*进行平衡使其pH值达到7.8以上,*平衡操作方法如下:
  
  ①液化*应贮存于-20℃,此时的*呈现结晶状态。从冰柜中取出的*首先在室温下放置使其达到室温,然后在68℃水浴中使*充分溶解。
  
  ②加入羟基喹啉(8-Quinolinol)至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不*抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。
  
  ③加入等体积的1MTris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。
  
  ④重复操作步骤③。
  
  ⑤加入等体积的0.1MTris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。
  
  ⑥重复操作步骤⑤,稍微残留部分上层水相。
  
  ⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。
  
  ⑧将*置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。
  
  13、20%(W/V)Glucose
  
  □组份浓度20%(W/V)Glucose
  
  □配制量100mL
  
  □配置方法1.称取20gGlucose置于100~200mL烧杯中,加入约80mL的去离子水后,搅拌溶解。
  
  2.加去离子水将溶液定容至100mL。
  
  3.高温高压灭菌后,4℃保存。
  
  14、SolutionI(质粒提取用)
  
  □组份浓度25mMTris-HCl(pH8.0),10mMEDTA,50mMGlucose
  
  □配制量1L
  
  □配置方法1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。
  
  1MTris-HCl(pH8.0)25mL
  
  0.5MEDTA(pH8.0)20mL
  
  20%Glucose(1.11M)45mL
  
  dH2O910mL
  
  2.高温高压灭菌后,4℃保存。
  
  3.使用前每50mL的SoliutionI中加入2mL的RNaseA(20mg/mL)。
  
  15、SolutionII(质粒提取用)
  
  □组份浓度250mMNaOH,1%(W/V)SDS
  
  □配制量500mL
  
  □配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。
  
  10%SDS50mL
  
  2NNaOH50mL
  
  2.加灭菌水定容至500mL,充分混匀。
  
  3.室温保存。此溶液保存时间不要超过一个月。
  
  注意:SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌。
  
  16、SolutionIII(质粒提取用)
  
  □组份浓度3MKOAc,5MCH3COOH
  
  □配制量500mL
  
  □配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。
  
  KOAc147g
  
  CH3COOH57.5mL
  
  2.加入300mL去离子水后搅拌溶解。
  
  3.加去离子水将溶液定容至500mL。
  
  4.高温高压灭菌后,4℃保存。
  
  17、0.5MEDTA(pH8.0)
  
  □组份浓度0.5MEDTA
  
  □配制量1L
  
  □配置方法1.称取186.1gNa2EDTA•2H2O,置于1L烧杯中。
  
  2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌。
  
  3.用NaOH调节pH值值8.0(约20gNaOH)。
  
  注意:pH值至8.0时,EDTA才能*溶解。
  
  4.加去离子水将溶液定容至1L。
  
  5.适量分成小份后,高温高压灭菌。
  
  6.室温保存。
  
  18、1MDTT
  
  □组份浓度1MDTT
  
  □配制量20mL
  
  □配置方法1.称取3.09gDTT,加入到50mL塑料离心管内。
  
  2.加20mL的0.01M的NaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。
  
  3.适量分成小份后,-20℃保存。
  
  19、10mMATP
  
  □组份浓度10mMATP
  
  □配制量20mL
  
  □配置方法1.称取121mgNa2ATP•3H2O,加入到50mL塑料离心管内。
  
  2.加20mL的25mMTris-HCl(pH8.0),搅拌溶解。
  
  3.适量分成小份,-20℃保存。
  
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