本检测方法是用来果胶酶的催化活性。本方法适用于各种固体和液体果胶酶制剂。
　　
　　[说明]
　　
　　本方法适合于果胶酶的质量分析和质量控制领域。但不是本公司产品及其它公司产品的活力的预测，而各种酶制剂的zui终的酶活力在良好的实验操作下仍可发挥出更好的催化活力。
　　
　　[原理]
　　
　　果胶物质主要存在于植物初生壁和细胞中间，果胶物质是细胞壁的基质多糖。果胶包括两种酸性多糖（聚半乳糖醛酸、聚鼠李半乳糖醛酸）和三种中性多糖（阿拉伯聚糖、半乳聚糖、阿拉伯半乳聚糖）。果胶酶本质上是聚半乳糖醛酸水解酶，果胶酶水解果胶主要生成β-半乳糖醛酸,可用次碘酸钠法进行半乳醛酸的定量,从而测定果胶酶活力。
　　
　　[果胶酶活力单位定义]
　　
　　1g(或1ml液体酶)酶粉,于50.0℃、pH3.5条件下,每分钟催化果胶水解生成1微克半乳糖醛酸的酶量为一个活力单位。
　　
　　1.试剂和仪器
　　
　　*本标准所使用所有的试剂若无任何说明，均为分析纯
　　
　　1.1醋酸
　　
　　1.2碘
　　
　　1.3碘花钾
　　
　　1.4浓硫酸
　　
　　1.5果胶（sigma公司）
　　
　　1.6*
　　
　　1.7碳酸钠
　　
　　1.8可溶性淀粉
　　
　　1.9水浴锅
　　
　　1.10碘量瓶
　　
　　2.试剂的制备
　　
　　2.1pH3.5的酸水
　　
　　用醋酸将蒸馏水调至3.5
　　
　　2.21%果胶溶液：
　　
　　准确称取分析纯果胶1g，用酸水溶解煮沸，冷却后过滤，定至100ml。
　　
　　2.20.1N碘液：
　　
　　准确称取*5g，用蒸馏水溶解后，加入2.54g碘，溶解后定容至100ml。
　　
　　2.30.025mol/L*：
　　
　　准确称取6.2g*，加蒸馏水后定容至1L
　　
　　2.40.5%可溶性淀粉指示剂：
　　
　　准确称取可溶性淀粉0.5g放入沸水中消煮至透明。
　　
　　2.51M碳酸钠溶液：
　　
　　准确称取10.6g碳酸钠，定容于100ml的水中
　　
　　2.62N硫酸：
　　
　　吸10ml的浓硫酸倒入170ml的水中
　　
　　2.7酶样的制备
　　
　　准确称取1.000g固体酶或移取1ml液体酶样，定容至100ml，于50℃水浴浸取1小时，过滤，滤液为供试酶液。则该酶已经稀释100倍。
　　
　　3.程序
　　
　　3.1取1%果胶酶10ml加入5ml酶液和5ml蒸馏水（PH3.5），在50℃水浴中保温反应1小时。
　　
　　3.2取出后加热煮沸2~3min，冷却后，补水至20ml。
　　
　　3.3取5ml反应液于100ml碘量瓶中，加1M碳酸钠溶液1ml，0.1N碘液5ml，摇匀，具塞，于室温暗处下放置20min。
　　
　　3.4取出后加2N硫酸2ml，立即用0.05N*溶液滴定至浅黄色，加1ml0.5%可溶性淀粉溶液，继续滴定至蓝色消失为止。
　　
　　3.5空白试验以煮沸失活的酶液或蒸馏水代替酶液进行滴定。
　　
　　3.6每个酶样zui少做两个平行样。
　　
　　4.计算
　　
　　4.1将测得的各平行样求OD值的均值。
　　
　　4.2计算酶的活性单位依据以下公式
　　
　　酶的活力=[(B-A)*N*0.5*175*20*n*1000]/[51*52*W*60]
　　
　　单位：U/g(ml)
　　
　　式中：A：样品滴定所消耗*的毫升数。
　　
　　B：空白滴定所消耗*的毫升数。
　　
　　N：*摩尔浓度。
　　
　　0.5：1当量*相当于0.5当量半乳糖醛酸。
　　
　　20：反应液总体积
　　
　　51：酶液体积以1ml计
　　
　　52：吸取反应液
　　
　　n：稀释倍数
　　
　　W：酶粉重量g或酶液体积ml
　　
　　随机推荐
　　
　　•果胶酶活力的测定
　　
　　乙试剂称取钼酸铵[（NH4）MO7O24•4H2O]25g溶于450mL水中，再缓慢加入浓硫酸21mL。另取25mL水，溶解纯结晶shen酸二钠（Na2HAsO4•7H2O）3g（可用H4As2O71.28g，以1mol/LNaOH19.24mL溶解，再加水4.75mL代替此液）。然后慢慢加入上述溶液中，充分混合，在37℃放置24～48h，
　　
　　•地高辛注射液_
　　
　　激动心肌收缩蛋白从而增加心肌收缩力，2负性频率作用：由于其正性肌力作用，使衰竭心脏心输出量增加，血流动力学状态改善，消除交感神经张力的反射性增高，并增强迷走神经张力，因而减慢心率，此外，小剂量时提高窦房结对迷走神经冲动的敏感性，可增强其减慢。
　　
　　•浓缩透明红葡萄汁
　　
　　如果用6000转/分，定额为5000升/小时的离心分离机，只达到3600升/小时的分离效率就比较满意。7.灭酶：分离果酱以后的葡萄汁仍然是混浊汁，此时带酶果汁用平板热交换器或管式消毒器灭酶、灭酶条件85℃，15秒。灭酶后立。
　　
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