预杂交液的制备：根据要杂交的膜的数量配制预杂交液，每25ml预杂交液（1~2张膜）的成分组成如下：
　　
　　H2O15ml
　　
　　20×SSPE6.25ml
　　
　　50×Denhardt2.5ml
　　
　　10%SDS1.25ml
　　
　　100mg/ml鲑鱼精DNA（缓加）400ml
　　
　　1、取适量小麦基因组DNA，用适量的限制性内切酶消化*（约5U/mgDNA，酶切12h左右），取少量电泳检测酶切*性；然后依次用酚：氯仿和氯仿：异戊醇抽提，乙醇沉淀。而后溶解在20mlTEBuffer中；
　　
　　2、在1%的琼脂糖凝胶上电泳10~12h，电压为3V/cm；
　　
　　3、电泳完毕后，将胶转入EB染色液中，染色10min，紫外灯下检测酶切结果；
　　
　　4、将胶转入500ml0.25N的HCl中，脱嘌呤15~30min，直至溴酚蓝变黄，用水洗一下；
　　
　　5、0.4N的NaOH处理20min。与此同时，尼龙膜在超纯水中润湿后，在0.4N的NaOH中泡5min以上；
　　
　　6、将凝胶翻转后放在滤纸桥上，放上一张与凝胶大小相当的尼龙膜（Hybond-N+，Amarsharm），赶除气泡，在膜上放3层滤纸，与尼龙膜大小相同，赶除气泡，将凝胶周围用胶片封好，放上大小相当的吸水纸，压上约500g的重物，转膜10h以上，其间更换吸水纸；
　　
　　7、标记点样孔一角，然后放在2×SSC中浸泡10min，并进行轻微震荡。用滤纸吸干，保鲜膜包好，置4℃存放备用；
　　
　　8、利用HYBAID固相杂交仪进行预杂交、杂交。杂交瓶中根据膜面积大小，加入10~20ml预杂交液，预热到65℃，然后放入尼龙膜。65℃，预杂交5~6h；
　　
　　9、采用Takara公司RandomprimerDNAlabelingkit进行探针标记，取适量待标记的DNA。片段和Randomprimer2ml，加入ddH2O至终体积14ml，95℃变性3min后立即冰浴5min，瞬时离心。然后在此管中，依次加入：
　　
　　10×buffer2.5ml
　　
　　dNTPMixture2.5ml
　　
　　Klenow酶1ml
　　
　　α-32P-dCTP5ml
　　
　　轻轻混匀，37℃反应30min~1h。然后65℃反应5min，95℃反应3min后迅速置于冰上冷却；
　　
　　10、将变性后的探针加到预杂交液中，继续于65℃杂交约12h；
　　
　　11、用2×SSC/0.5%SDS洗膜液于65℃洗膜15min，重复1次。然后，再用0.2×SSC/0.5%SDS洗膜液于65℃洗膜15min，重复1次；
　　
　　12、检测杂交信号与背景情况，直至探测器探测的信号为10个counters左右，用滤纸吸干杂交膜，用保鲜膜包好，压磷屏；
　　
　　13、尼龙膜可以反复进行分子杂交，去除尼龙膜上原杂交探针的方法如下：将0.1×SSC/0.5%SDS洗液加热到100℃，放入杂交膜，在大于95℃条件下洗5min，重复3次，将洗好的杂交膜放入2×SSC中漂洗5min，滤纸吸干，保鲜膜包好，4℃存放。
　　
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