兔胰淀素(Amylin)ELISA Kit

ELISA试剂盒操作步骤和注意事项
试剂盒组成：48孔/96孔
主要用途：科研检测
产品规格：96T/48T
96T指可以做94个标本，2个标准对照
48T指可以做47个标本，1个标准对照
96T-84个样本
48T-42个样本
有效期：6个月 
保存：2-8℃
ELISA试剂盒操作步骤 
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。 
1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 
2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加*标记抗体工作液 100μl（取1μl*标记抗体加99μl*标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。 
3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。 
4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同*标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。 
5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。 
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。 
7. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。 
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。 
注： 
1. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。 
2. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
3. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。 
4. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、*标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、*标记抗体工作液、或辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。 
5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。 
需要而未提供的试剂和器材 
1. 标准规格酶标仪 
2. 高速离心机 
3. 电热恒温培养箱 
4. 干净的试管和Eppendof管 
5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器 
6. 蒸馏水，容量瓶等 
洗板方法 
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将*的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。 
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 
计算 
以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 
ELISA试剂盒注意事项 
1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。 
2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。 
3. 一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，*使用排枪加样。 
4. 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。 
5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请zui后乘以稀释倍数。 
6. 在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。 
7. 底物请避光保存。 
8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
产品用途：科研ELISA检测试剂盒.本公司可提供实验代测服务.
检测原理： 采用双抗体夹心ABC-ELISA法 
产品种属齐全有：人，小鼠，大鼠，豚鼠，猪，犬，兔，牛，羊，猴，兔，马等动物种属。
待检样本：体液，血清，血浆，细胞培养上清液，尿液，组织匀浆,心房水标本等等。
保存条件：2-8℃
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