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大鼠GHRP-Ghrelin elisa操作步骤

时间:2015-1-23阅读:278
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大鼠GHRP-Ghrelin elisa操作步骤本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定大鼠血清,血浆及相关液体样本中生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)的含量。
大鼠GHRP-Ghrelin elisa操作步骤 实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)水
平。用纯化的大鼠生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)抗体包被微孔板,制成固相抗体,
往包被单抗的微孔中依次加入生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin),再与HRP 标记的生
长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*
洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui
终的黄色。颜色的深浅和样品中的生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)呈正相关。用酶标
仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中大鼠生长激素释放肽
ghrelin(GHRP-Ghrelin)浓度。
大鼠GHRP-Ghrelin elisa操作步骤 试剂盒组成:
试剂盒组成 48 孔配置 96 孔配置 保存
说明书 1 份 1 份
封板膜 2 片(48) 2 片(96)
密封袋 1 个 1 个
酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
标准品:1800ng/L 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
标准品稀释液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 2-8℃保存
酶标试剂 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
样品稀释液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
显色剂A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
显色剂B 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
终止液 3ml×1 瓶 6ml×1 瓶 2-8℃保存
浓缩洗涤液 (20ml×20 倍)×1 瓶 (20ml×30 倍)×1 瓶 2-8℃保存
样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20 分钟,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上
清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20 分钟后,离心
20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次
离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程
中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/
2
分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞
浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分
钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备
用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器
将标本匀浆充分。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待
检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上
进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。


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