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人γ干扰素(IFN-γ)实验步骤说明

时间:2014-6-16阅读:449
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人γ干扰素(IFN-γ)实验步骤说明

1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10 孔,在*、第二孔中分别加标
准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二
孔中各取100μl 分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,
混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 弃掉,再各取50μl 分别加到第五、第六孔
中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各
取50μl 分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混
匀后从第七、第八孔中分别取50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准
品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl 弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,
浓度分别为300ng/L,200ng/L ,100ng/L,50 ng/L, 25ng/L)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样
品zui终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混
匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液:将30(48T 的20 倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T 的20 倍)倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此
重复5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。

人γ干扰素(IFN-γ)实验步骤说明

试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R 值为0.95 以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%

人γ干扰素(IFN-γ)实验步骤说明

亚硫酸铁琼脂
大鼠β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)ELISA定量试剂盒
兔儿茶酚胺(CA)ELISA定量试剂盒
小鼠胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)ELISA定量试剂盒
葡萄糖半固体培养基
小鼠抗心肌抗体(AMA)ELISA定量试剂盒
肠道菌增菌肉汤
人潜伏膜蛋白1(LMP-1)ELISA定量试剂盒
人前列腺素D合成酶(PGDS)ELISA定量试剂盒
大鼠瘦素(LEP)ELISA定量试剂盒
小鼠雌激素(E)ELISA定量试剂盒
牛血小板活化因子(PAF)ELISA定量试剂盒
*麦康凯琼脂基础,250g培养基
葡萄糖琼脂
产毒培养基,350ml培养基
人Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)ELISA定量试剂盒

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