5-羟色胺抗体抗体规律 

（1）初次反应产生抗体：当抗原*次进入机体时，需经一定的潜伏期才能产生抗体，且抗体产生的量也不多，在体内维持的时间也较短。 
（2）5-羟色胺抗体再次反应产生抗体：当相同抗原第二次进入机体后，开始时，由于原有抗体中的一部分与再次进入的抗原结合，可使原有抗体量略为降低。随后，抗体效价迅速大量增加，可比初次反应产生的多几倍到几十倍，在体内留存的时间亦较长医`学教育网搜集整理。 
（3）5-羟色胺抗体回忆反应产生抗体：由抗原刺激机体产生的抗体，经过一定时间后可逐渐消失。此时若再次接触抗原，可使已消失的抗体快速上升。如再次刺激机体的抗原与初次相同，则称为特异性回忆反应；若与初次反应不同，则称为非特异性回忆反应。非特异性回忆反应引起的抗体的上升是暂时性的，短时间内即很快下降。

初次应答:①潜伏期长 5-羟色胺抗体②产生的抗体浓度低 ③在体内持续时间短 ④抗体与抗原的亲和力低，以IgM为主。
再次应答:①潜伏期短，一般为1~3天，血液中即出现抗体 ②产生的抗体浓度高 ③在体内持续时间长 ④抗体与抗原的亲和力高，以IgG为主。
【5-羟色胺抗体抗体的异质性。抗体的组成极为复杂，*受体5(SSTR5)抗体是由成千上万、多种多样的免疫球蛋白（Ig）分子所组成。这些Ig分子在形状、大小、5-羟色胺抗体结构以及氨基酸的组成和排列上，既相似，又有差别。由于有差别，它们的电泳活性就有很大的变化。】
步法：EnVision System
EnVision显色系统是将二抗和酶通过一个多聚葡聚糖骨架联接成一个多聚体（即EnVision）直接放大信号40-50倍，把传统的二抗、三抗分别孵育合为一次孵育。特点：敏感、省时、方便、背景低

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■中文名称：5-羟色胺抗体
■英文名称：Anti-5-HT（5-hydroxytryptamine）
■产品货号：CL-1126T
■产品规格：0.1ml/100ug  0.2ml/200ug
■浓度说明：1mg/1ml
■保存条件:Store at -20 °C
■产品品牌：Abcam、santa、上海诚凛生物
■产品性状：冻干粉或液体
■克隆性：多克隆、单克隆
■来源物种：兔、小鼠、羊、大鼠
■交叉反应:Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Guinea Pig
■产品应用：WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
Western blot is a powerful technique in that; it leads to simultaneously detection of a specific protein by means of its antigenicity and its molecular mass. The proteins are first separated by mass using SDS-PAGE, 5-羟色胺抗体transferred from gels onto membranes and then specifically detected in the immunoassay step. Information on activation status (i.e. enzyme pro-form vs. active species, unless specific antibodies against the pro species are available), oligomeric arrangement and post-translational modifications can also be deduced from this technique.
The efficiency of protein transfer from the SDS-PAGE gel to the support membranes can be affected by the gel thickness and the total acrylamide concentration. Transfer buffers can also affect the efficiency of protein migration through the gel. While methanol is necessary to prevent gel swelling with heating, and to keep protein adsorbed to membrane, methanol-containing buffers often result in the decrease in pore size and may even precipitate proteins5-羟色胺抗体 within the gel. Poor transfer can be remedied by using methanol-free transfer buffer.
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■免疫组化和Western Blot可以用同一种抗体吗？
解答：免疫组化时抗体识别的是未经变性处理的抗原决定簇（又称表位），有些表位是线性的，而有的属于构象型；线性表位不受蛋白变性的影响，天然蛋白和煮后的蛋白都含有；构象型表位由于受蛋白空间结构限制，煮后变性会消失。如果你所用的抗体识别的是蛋白上连续的几个氨基酸，也就是线性表位，那么这种抗体可同时用于免疫组化和Western，而如果抗体识别构象形表位，则只能用于免疫组化。一般抗体说明书上都有注明此种抗体识别的氨基酸区间。（限于单抗）
■Western Blot 中抗体的重复应用问题
解答：抗体工作溶液一般不主张储存反复使用，但是如抗体比较珍贵，可反复使用2－3次。稀释后应在2－3天内使用，4℃保存，避免反复冻融。

【多克隆抗体的制备】
⒈ 实验动物
成年兔。
⒉ 实验器材
特制兔盒；刀片；25G针头；1ml注射器；20 ml 血液收集管；药铲；离心机以及塑料离心管；加样器及加样管；烧杯。
⒊ 实验试剂
⑴ 抗原；乙醇；20mM 磷酸缓冲溶液pH7.2。
⑵ 福氏*佐剂和福氏不*佐剂
（实验方法）
⒈ 抗原的制备
抗原制备的主要目的在于在免疫动物体内产生zui强、zui适当的抗体。由于纯化的抗原适合产生抗体，因此在注射前通常采用一些经典的方法，比如柱层析、分级萃取、亚细胞分离等进行抗原的分离和纯化。如果多肽抗原在SDS/PAGE中为可见的单一带，抗原从凝胶5-羟色胺抗体中的抽提可作为纯化的zui后一个步骤。
⒉ 预放血
轻轻的将兔子放在特制兔盒中，处于放松状态的兔子采血会较容易。按压兔子耳根部直至血管突出,然后将针头插入耳部血管的中上部，观察到进针后小心推出活塞收集血液1ml -5ml。结束收集后，退出针头并按压伤处以制止血流，再用乙醇消毒。取收集的血液在37°C恒温箱中放置30分钟以防止激活补体系统，再将试管在4°C放置过夜使血液凝固。用药铲将血凝块从管壁上拨落，将血液转移至塑料离心管中，4°C，10,000g离心10分钟，收集上清液在4°C保存。
⒊ 注射抗原
⑴ 准备两只成年兔，将100µg抗原/兔溶入1ml磷酸缓冲溶液中待用。在1ml福氏不*佐剂中加入分枝杆菌制成*佐剂，并加入1ml抗原溶液，剧烈震荡使之充分乳化，用3ml注射器抽取该乳化液，接上25G针头，排除注射器中的气泡。从笼中取出兔子放在平坦处，在4个不同的部位进行皮下注射，两处在后背，两处在大腿处。抚去注射处的兔毛并用乙醇消毒暴露的皮肤。捏出皮肤，将针头以相对皮肤15度的角度进针，进针深度为1cm-2cm，小心不要刺入肌肉中，在4个不同部位分别各注射约500µl抗原溶液。注射结束后，将针在注射处放置几秒钟后再轻轻拔出，并用乙醇在注射处消毒。在4个部位重复上述操作。用相同方法免疫另一只家兔。
⑵ 每4-6周注射抗原，并在注射后的7天-10天按照步骤2收集血液。将收集的血液与注射前收集的血液进行比较，检查是否有抗体产生。待确定产生抗体后可大量收集血液，但每只兔子收集血液不能多于40ml以防止休克。
⒋ 收集血液
⑴ 将家兔轻轻放入固定架上,二甲苯涂于耳部血管的上中部，用刀片倾斜45°在该处切出0.23cm-0.3cm的切口使血液能自由的流出。用消毒后的管收集滴出的血液，若在结束之前出现凝固可用温水轻擦切口处，再继续收集。收集适量血液后可用消毒后的纱布轻擦患处，轻按患处10秒-20秒确定血流停止后方可结束。
⑵ 将血液在37°C恒温箱中放置30分钟，再在4°C放置过夜。用药铲将血凝块从管壁上拨落，将血液转移至塑料离心管中，4°C，10,000g离心10分钟，收集上清液即为抗血清，可在-20°C保存数年。
（实验结果）
利用蛋白质免疫印迹法或免疫电泳方法检查抗体产生情况。

【5-羟色胺抗体单克隆抗体的优点与局限性】：单克隆抗体和多克隆抗体各有其优点和局限性，只有对它们有全面的了解，才能根据不同应用领域的要求，正确的选择和应用。
 1.单克隆抗体的优点： （1）杂交瘤可以在体外“*”地存活并传代，只要不发生细胞株的基因突变，就可以不断的生产高特异性、高均一性的抗体。 （2）可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体。 （3）由于可能得到“无*”的均一性抗体，所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法，如IRMA和ELISA等。 （4）由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗。
 2.单克隆抗体的局限性： （1）单克隆抗体固定的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围。由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成。（2）单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。 （3）制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗体的价格也较高。
单抗：识别单个抗原表位，所以特异性高。但如果所识别的抗原表位被破坏，则会影响实验结果，这也是单抗的缺点之一；   
多抗：虽然存在交叉反应的问题，但由于识别多个抗原表位，所以即使有少数几个抗原表位被破坏，仍然不会影响实验结果，这是多抗的优点之一。  
二者各有利弊,一般说来只要说明书上标明可以做组化就都可以。  
专门用于免疫组化的抗体多为IgG类单抗，识别抗原的空间构象。需要结合是否同时做WESTERN或荧光或沉淀等做综合的选择。单抗多是鼠源，种植在腹腔的杂交瘤细胞，5-羟色胺抗体通过腹水获得；多抗是兔羊源，通过免疫动物，从血清中获得。