1、灭菌过程的某些环节
原方法存在问题：一是捆扎的试管管口竖放, 灭菌结束又冷却10min, 高压锅盖上的冷凝水, 容易打湿棉塞, 为杂菌污染创造条件。二是排除冷空气的操作不安全，锅内有压力时排除冷空气, 由于内外的压力差, 容易冲掉棉塞, 而且需要2次操作, 更增加了不安全的因素。
改进方法：1）在竖放的试管上放少量棉花, 使之弓起成馒头形, 上用聚丙烯薄膜盖好, 四周的薄膜要置于试管与内锅内壁之间。2）加温后, 就把放气阀打开, 当有水蒸汽冒出, 持续2~3分时, 关闭放气阀。上述做法优点：一是高压锅盖上的冷凝水可沿凸起的薄膜流人内锅底, 薄膜少量的冷凝水可被放置的棉花吸收, 这样可保持棉塞的干燥。二是只需1次操作, 就能*排除冷空气, 且安全可靠。
2、搁置斜面
原方法存在问题：从高压锅内刚取出的试管, 棉塞未干就摆斜面, 容易沾杂菌抱子而染杂；而且温度在迅速下降的过程中, 会使试管壁上形成冷凝水, 对菌丝生长不利。
改进办法：1）灭菌结束后, 锅内余水, 用虹吸管抽出。2）操作者戴湿手套将整捆试管叠放于锅内的木条上, 所摆斜面的长度同教材。3）盖上锅盖, 稍留缝隙, 放在火上加热片刻以烘干棉塞。4）培养基缓慢冷却后, 直接放人接种箱内。
3、培养基的分装
原方法存在问题：分装时间长时, 琼脂易凝固, 还需要再加热、再分装, 工序麻烦，每管分装的数量靠眼去把握, 容易出误差操作须特别小心, 稍不留意培养基就会沾在管口或管壁上。
改进方法：将配好的培养基倒入方形盘内, 待其自然冷却后, 用小刀切成相等的方块再分别装人试管内。这样培养基不沾污管口和管壁、分装量可自由调整, 且不受温度限制, 能保证分装均匀, 单人、多人均可操作。
4、加棉塞
原方法存在问题：没有阐述棉塞的制作方法, 学生不知道如何制作, 也没有阐述合格棉塞的标准, 学生制作时, 把握不住棉塞的松紧度。
改进方法：棉塞的制作, 取适量的棉花根据试管的大小确定, 做成均匀的方片、将相邻的边分别折叠一下, 再卷成1个棉柱, 将有毛茬的一端折转平贴在棉柱上, 并把此端塞入试管口2/3, 管外部分不少于1cm。检查棉塞的松紧度：将棉塞提起, 试管跟着被提起而不下滑, 表明棉塞不松；将棉塞拔出, 可听到轻微的声音, 表明棉塞不紧。
