毛霉*

毛霉操作前打开紫外灯30-60分钟，这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果，但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置，可以与紫外灯一起打开，毛霉此时不需要抽滤开的过大就可以。（所谓的抽滤装置就是就是那个风机，就是吹风超净工作台，不是过滤培养液的）!

细胞传代培养（消化法）具体操作：

一：传代前准备；

1.预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。

2.用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。

3.正确摆放使用的器械：保证足够的*作空间，不仅便于*作而且可减少污染。

4.点燃酒精灯：注意火焰不能太小。

5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶，放入微波炉内高火，8分钟再次消毒。

6.取出预热好的培养用液：毛霉取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。

7.从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。

8.打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。

二：胰蛋白酶消化；

1.加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以盖住细胞，*消化温度是37℃。

2. 毛霉 显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。

3.吸弃消化液加入培养液：弃去胰蛋白酶液，注意更换吸管，加入新鲜的培养液。

三：吹打分散细胞；

1.吹打制悬：用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。

2.吸细胞悬液入离心管：将细胞悬液吸入10ml离心管中。

3.平衡离心：平衡后将离心管放入台式离心机中，以1000转/分钟离心6-8分钟。

4.弃上清液，加入新培养液：弃去上清液，加入2ml培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。

四：分装稀释细胞；

1.分装：将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖。

2.显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察细胞量，必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。zui后要做好标记。

五：继续培养；

用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO2培养箱中继续培养。毛霉传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25％时为一个＋，占50％为＋＋，占75％时为＋＋＋。  

XY1433    鲑鱼胚胎细胞,RTG细胞

XY1434    鲑鱼胚胎细胞,CHSE细胞

XY1435    光滑念珠菌

XY1436    光孢短柄帚霉

XY1437    骨髓瘤细胞株 U266细胞,

XY1438    骨髓瘤细胞,SP2/0细胞

XY1439    骨髓瘤细胞,P3X63Ag8细胞

XY1440    骨髓瘤细胞,P3X63Ag8.653细胞

XY1441    骨髓瘤细胞,P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]细胞

XY1442    骨髓瘤细胞,FO细胞

XY1443    骨肉瘤细胞,U-2 OS细胞

XY1444    骨肉瘤细胞,SW1353细胞

XY1445    骨肉瘤细胞,MG-63细胞

XY1446    谷氨酸棒杆菌

XY1447    构巢曲霉

XY1448    肾细胞隆突型 MDCK superdome细胞

XY1449   肾细胞,Super Tube细胞

XY1450    肾细胞,MDCK细胞,

XY1451    肾细胞,MDCK(NBL-2)细胞

XY1452    肾细胞,MDCK (NBL-2)细胞

XY1453    肾上皮细胞,MDCK-EGFP-puro细胞

XY1454    肾恶性组织细胞增生症细胞,DH82细胞,

XY1455    垂体细胞

XY1456    宫颈癌细胞,HeLa细胞

XY1457    宫颈癌细胞,HeLa 229)细胞

XY1458    宫颈癌细胞,HCE1细胞

XY1459    根土壤杆菌（发根植物单胞菌）

XY1460    睾丸酮丛毛单胞菌

XY1461    睾丸间质细胞瘤细胞,MLTC-1细胞

XY1462    高转移人肝癌细胞,MHCC97-H细胞,

XY1463    高转移人肝癌细胞,LM3细胞

XY1464    高转移卵巢癌细胞,HO-8910PM细胞

XY1465    高转移肺癌细胞,95-D细胞

XY1466    肝细胞,HL-7702细胞

XY1467    肝卵圆细胞,HOC细胞