桔青霉*

桔青霉操作前打开紫外灯30-60分钟，这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果，但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置，可以与紫外灯一起打开，桔青霉此时不需要抽滤开的过大就可以。（所谓的抽滤装置就是就是那个风机，就是吹风超净工作台，不是过滤培养液的）!

细胞传代培养（消化法）具体操作：

一：传代前准备；

1.预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。

2.用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。

3.正确摆放使用的器械：保证足够的*作空间，不仅便于*作而且可减少污染。

4.点燃酒精灯：注意火焰不能太小。

5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶，放入微波炉内高火，8分钟再次消毒。

6.取出预热好的培养用液：桔青霉取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。

7.从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。

8.打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。

二：胰蛋白酶消化；

1.加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以盖住细胞，*消化温度是37℃。

2. 桔青霉 显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。

3.吸弃消化液加入培养液：弃去胰蛋白酶液，注意更换吸管，加入新鲜的培养液。

三：吹打分散细胞；

1.吹打制悬：用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。

2.吸细胞悬液入离心管：将细胞悬液吸入10ml离心管中。

3.平衡离心：平衡后将离心管放入台式离心机中，以1000转/分钟离心6-8分钟。

4.弃上清液，加入新培养液：弃去上清液，加入2ml培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。

四：分装稀释细胞；

1.分装：将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖。

2.显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察细胞量，必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。zui后要做好标记。

五：继续培养；

用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO2培养箱中继续培养。桔青霉传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25％时为一个＋，占50％为＋＋，占75％时为＋＋＋。  

XY1362    结肠腺癌细胞,Caco-2细胞

XY1363    结肠癌细胞,SW620细胞

XY1364    结肠癌细胞,SW480 [SW-480细胞

XY1365    结肠癌细胞,LoVo细胞

XY1366    结肠癌细胞,HT-29细胞

XY1367    结肠癌细胞,HCT 116细胞

XY1368    结肠癌细胞,COLO 205细胞

XY1369    杰丁汉逊酵母

XY1370    胶质母细胞瘤细胞,A172细胞

XY1371    胶质瘤细胞,U251细胞

XY1372    胶质瘤细胞,SHG-44细胞

XY1373    胶质瘤细胞,C6细胞

XY1374    健强地霉

XY1375    菅囊酵母

XY1376    艰难梭菌Clostridium difficile 

XY1377    间型酒香酵母

XY1378    假结核耶尔森氏菌

XY1379    假交替单胞菌

XY1380    假单胞杆菌

XY1381    甲状腺癌细胞（未分化 )ARO细胞

XY1382    甲型副伤寒沙门氏菌

XY1383    荚膜红细菌

XY1384    寄生曲霉

XY1385    急性淋巴母细胞白血病细胞,MOLT-4细胞

XY1386    急性T细胞白血病细胞) Jurkat细胞

XY1387    急性T淋巴细胞白血病细胞,TALL-104细胞

XY1388    急髓白血病细胞,HL60细胞

XY1389    畸胎癌细胞,P19细胞

XY1390    鸡油菌

XY1391    鸡腿蘑（毛头鬼伞）

XY1392    鸡胚原代肝细胞,CEL细胞

XY1393    鸡胚成纤维细胞,UMNSAH/DF-1细胞

XY1394    鸡淋巴瘤细胞,DT40细胞

XY1395    黄直丝链霉菌