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ELISA试剂盒实验*的稀释液
ELISA试剂盒高质量的速溶食用低脂奶粉即可直接当作剂运用,但由于奶粉的成份复杂,并且后的载体不易长时间保存,因此在试剂盒的制备中较少运用。
包被用抗原或抗体的浓度,包被的温度和时间,包被液的pH等应根据试验的特色和资料的性质而选定。
特别是用单抗腹水直接包被时,因其中很多非抗体蛋白在包被时相同也吸附在固相表面,业已起到了相似剂的效果。
通常在ELISA板孔中参加包被液后,在4-8℃冰箱中放置过夜,37℃中保温2小时被认为具有对等的包被效果。
并非一切的ELISA固相均需,不妥反而会使阴性本底增高。
脱脂奶粉也是一种杰出的剂,其zui大的特色是价廉,能够高浓度运用(5%)。
抗体和蛋白质抗原通常选用pH9.6的碳酸盐缓冲液作为稀释液,也有用pH7.2的磷酸盐缓冲液及pH7~8的Tris-HCL缓冲液作为稀释液的。
ELISA试剂盒的手续与包被相相似。
通常蛋白质的包被浓度为100ng/ml-20ug/ml。
包被的zui适当浓度随载体和包被物的性质可有很大的改变,每批资料需经过试验与酶物的浓度协调选定。
通常说来,双抗体夹心法,只需酶符号物是高活性的,操作时洗刷*,不经也可得到满足的成果。
是不是必要,取决于ELISA的形式及详细的试验条件。
继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的进程。
包被好的ELISA板枯燥后放入密封袋或锡袋中,在低温可保存数月。
抗原或抗体包被时所用的浓度较低,吸收后固相载体表面尚有未被占有的旷地闲暇,即是让很多不相关的蛋白质充填这些旷地闲暇,然后排斥在ELISA这以后的过程中搅扰物质的再吸附。
但在直接法测定中,通常是不行少的。
ELISA试剂盒zui常用的剂是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白,也有用10%的小牛血清或1%明胶作为剂的。
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