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牛血小板因子4(PF4)ELISA试剂盒本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被单抗的微孔中依次加入待测物质,再与HRP标记的抗原抗体结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测物质呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中待测物质的浓度。
注意事项:牛血小板因子4(PF4)ELISA试剂盒标本的处理:
(1)细胞培养上清液 根据需要用试剂盒中的标准稀释液稀释样品,然后按照说明书所述方法检测。推荐稀释浓度是稀释5倍。
(2)脑脊液 根据需要用试剂盒中的标准稀释液稀释样品,然后按照说明书所述方法检测。推荐稀释浓度是5倍。
(3)血浆 ①用EDTA2K离心收集在真空血液收集管中的血液,5,000×g,15分钟,4℃,分离血浆样品,然后储存在零下80℃直到使用。②用试剂盒中的标准稀释液5倍稀释血浆以避免血浆中的干扰物质影响检测,按照说明书方法检测。
分析原理:牛血小板因子4(PF4)ELISA试剂盒是基于标准的双抗夹心酶联免疫分析技术。将人肿瘤 坏死因子受体超家族成员B特异性抗体包被于96孔板中人肿瘤坏死因子受体超家族成员B的检测抗体为生 物素标记抗体试验样品和生物素标记的检测抗体相继加入到96孔中,然后洗涤平板。生物素-HRP加入96 孔中,未与生物素标检测抗体结合的,被洗涤缓冲液洗掉HRP的底物TMB可与HRP(辣根过氧化物酶)发生 酶促反应。TMB被HRP催化后变成蓝色物质,在加入酸性终止液后变为黄色。黄颜色的深浅与人肿瘤坏死因 子受体超家族成员B样品被捕获的量成正比。
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