大鼠谷氨酸脱羧酶自身抗体（GAD-Ab）ELISA试剂盒 返回列表页

大鼠谷氨酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)ELISA试剂盒实验步骤 

一、预试验（一）抗体包被的酶标板的制备

1.  以碳酸盐缓冲液将抗体稀释成适当浓度（参考：5ug/ml），加入酶标板（50ul/孔），以胶带封口，于4℃过液。

2.  弃抗体液，以双蒸水冲洗3次，自然干燥后以胶带封口。此为由已知抗体包被的酶标板，备用。

（二）底物浓度的摸索在底物缓冲液中加入不同量的底物（参考：5mg/10ml），加入酶标板中（50ul/孔），以胶带封口，37℃避光保存2h，在没有明显变色的条件下选择尽可能大的底物浓度。

（三）酶标抗原浓度的摸索选择明确为阴性的标本，加至已包被抗体的酶标板中（50ul/ 孔）；用稀释液稀释酶标抗原至适当倍数（参考：40~4000倍），同时加入酶标板中（50ul/ 孔），混合后封口后于37℃作用30min。大鼠谷氨酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)ELISA试剂盒以洗液连续冲洗5次，然后于吸水纸上拍干，加入已摸索好的底物封口后于37℃作用30min，在保持有明显变色的条件下选择尽可能小的酶标抗原浓度。

二、正式试验

1.  以稀释液将待检标本做适当稀释（预试中确定）加入包被有已知抗原的酶标板中（50ul/孔），加封口胶带于37℃作用30min。

2.  弃反应液，以冲洗液连续洗板5次并于吸水纸上拍干。

3.  加入酶标抗体（浓度在预试中确定）。加封口胶带后于37℃作用30min。

4.  重复第2步。

5.  加底物（浓度在预试中确定），加封口胶带后于室温下避光作用5-60 min，其间不时观察，显色满意后加终止液50ul/孔。

6.  于酶标仪测定OD值，OPD用492nm测定，TMB用450nm测定。窗体顶端

大鼠谷氨酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)ELISA试剂盒结果演示

大鼠谷氨酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)ELISA试剂盒结果判断定性测定 

  定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出"有"或"无"的简单回答，分别用"阳性"、"阴性"表示。"阳性"表示该标本在该测定系统中有反应。"阴性"则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果，即用滴度来表示反应的强度，其实质仍是一个定性试验。在这种半定量测定中，将标本作一系列稀释后进行试验，呈阳性反应的zui高稀释度即为滴度。根据滴度的高低，可以判断标本反应性的强弱，这比观察不稀释标本呈色的深浅判断为强阳性、弱阳性更具定量意义。

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