酶联法检测梅毒螺旋体抗体（齐一生物）

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酶联法检测梅毒螺旋体抗体

[检测方法] ELISA法

[方法学原理] 用精制的基因工程表达的梅毒螺旋体特异性抗原包被固相载体，加患者血清后，如患者血清中有相应抗体，可形成抗原抗体复合物。在此基础上加入酶标记抗原，即可形成抗原—抗体—酶标记复合物。再加入酶底物，底物经酶分解后显色，即为阳性反应。反之，若患者血清中无相应抗体，则酶标记抗原就不能与包被抗原相结合，从而加入酶底物不会显色，此为阴性反应。

[标本准备] 静脉血2ml，不抗凝。

[试剂]

1．TP酶标板

2．TP阳性对照

3．TP阴性对照

4．TP酶标试剂

5．显色剂A

6．显色剂B

7．终止液

8．浓缩洗涤液

[仪器] 酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。

[检测步骤]

1．配制洗涤液 将50ml浓缩洗涤液(20X)用蒸馏水或去离子水稀释至1 000ml备用。

2．根据标本数量，将酶标板条固定于板架上，每板设阴性对照2孔，阳性对照2孔，空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步相同)。

3．加酶 每孔加100gl酶标试剂。

4．加样 分别在相应孔中加入待检样品，阴性对照、阳性对照20u1，振荡混匀。

5．温育 用封板膜封板后，置37℃环境中温育60min。

6．洗涤 小心将封板膜揭掉，用洗涤液充分洗涤6遍，zui后一次尽量拍干。

7．显色 每孔加显色剂A、B各50ul，轻轻混匀，用封板膜封板后置37℃环境中避光显色15min。

8．测定 每孔加终止液50gl，混匀，以空白调零点，用酶标仪450nm波长测定各孔OD值。

[结果判定]

1．临界值(cutoff)计算cutoff＝阴性对照孔OD均值+0．18。

2．阳性判定 样品OD值≥cut off值为梅毒螺旋体抗体阳性。

3．阴性判定 样品OD值

[正常参考值] TPAb阴性

[注意事项)

1．检测必须符合实验室管理规范和生物安全守则的规定。操作时必须戴手套、穿工作服，严格执行消毒隔离制度。所有样品、洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

2．梅毒螺旋体抗体检测结果的判定必须以酶标仪读数为准，在正常情况下，本试验阴性对照孔OD值应≤0．10，阳性对照孔OD值应≥0．80。若阴性对照>0．10，应查明原因，必要时应重新操作。

3．试剂盒从冷藏环境中取出时应置室温环境中平衡15～30min后再用，未用完的微孔条用自封袋密封保存。

4．洗涤液可用蒸馏水或去离子水配制。洗涤时各孔均需加满洗涤液，防止孔内有游离酶不能洗净，使用洗板机洗涤时应设置30～60s的浸泡时间。

5．不同批次试剂不能混用，封板膜为一次性用品，不能重复使用。

[临床意义] 以梅毒螺旋体为抗原检测血清中特异性抗体，敏感性高，特异性强，是目前较好的检测方法。阳性见于梅毒螺旋体感染，但此类抗体除IgM外，即使经过足量抗梅毒治疗，仍能在患者体内持续存在甚至保留终身，因此不适于观察疗效、复发及再感染。但经治疗后，IgM比抗心磷脂抗体消失快。因此，TP-IgM的存在是活动性梅毒的一个重要指征。

1期梅毒(硬性下疳，感染后l至数周)阳性率FTA—A为81％～87％，TPA为50％～60％，RPR为68％～76％，早期诊断TPA敏感性较低。2期梅毒(感染后8—10周左右)，FTA-A、TPA和RPR阳性率均可达99％～100％。晚期及隐性梅毒FTA—A和TPA阳性率95％～100％，RPR下降至66％～68％。

除梅毒螺旋体感染外，一些非梅毒螺旋体感染如品他、雅司等热带性密螺旋体感染症，口腔、齿槽及眼结膜等密螺旋体感染症亦可呈假阳性；SLE血清存在的抗核抗体，FTA-A可呈假阳性反应。

以RPR为代表的梅毒血清学非特异性反应和以TP-Ab为代表的梅毒血清学特异性反应在临床应用上各有其优缺点，二者可联合使用。其结果解释见表。

梅毒血清学检查的比较

梅毒血清学试验方法较多，无论哪一种方法其敏感性和特异性都达不到100％。因此，对可疑病例应采用2～3种方法联合使用，以提高诊断的正确率。