人 C-反应蛋白（CRP）试剂盒使用说明

人 C-反应蛋白(CRP)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书

本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中 C-反应蛋白(CRP)的含量。

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人 C-反应蛋白(CRP)水平。用纯化的人 C-反应蛋白(CRP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入 C-反应蛋白(CRP)，再与 HRP 标记的 C-反应蛋白(CRP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的 C-反应蛋白(CRP)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人 C-反应蛋白(CRP)的浓度。

操作步骤：

• 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10 孔，在*、第二孔中分别加标准品 100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液 50μl，混匀；然后从*孔、第二孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉，再各取 50μl 分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取 50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液 50μl，混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50μl，浓度分别为 1800μg/L，1200μg/L ，600μg/L，300μg/L，150 μg/L）。

• 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品zui终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

• 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

• 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

• 配液：将 30（48T 的 20 倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30（48T 的 20 倍）倍稀释后备用。

• 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

• 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 10 分钟.

• 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

• 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

  试剂盒性能：

  1.样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.92 以上。

  2.批内与批间应分别小于 9%和 15%