For Research Use Only

仅供研究用

货号：QY-M30506

鸡新城疫病毒抗体(NDV Ab)酶联免疫分析（ELISA）

试剂盒使用说明书

本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定鸡血清，血浆及相关液体样本中新城疫病毒抗体(NDV Ab)的水平。

实验原理：

本试剂盒采用双抗原夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中鸡新城疫病毒抗体(NDV Ab)。用纯化的鸡新城疫病毒抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中鸡新城疫病毒抗体(NDV Ab)相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与 HRP 标记的鸡新城疫病毒抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中鸡新城疫病毒抗体(NDV Ab)的存在与否。

操作步骤：

1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

3.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

4. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

5. 配液：将 30（48T 的 20 倍）倍浓缩洗涤液加蒸馏水至 600ml 后备用

6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

7. 显色：每孔先加入显色剂 A 50μl，再加入显色剂 B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 10 分钟

8. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

9. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

结果判定：

试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00;

阴性对照平均值≤0.15 临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.20

阴性判定：样品 OD 值< 临界值（CUT OFF）者为鸡新城疫病毒阴性阳性判定：样品 OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为鸡新城疫病毒阳性

注意事项

1. 操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

3. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

4. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5. 底物请避光保存。

6. 试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm

7. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须注意安全。